目的： 原发性人类巨细胞病毒(HCMV)孕期感染胎儿80％可出现智力低下，视力、听力损伤，严重者引起流产、死胎。免疫抑制患者感染HCMV可导致间质性肺炎，死亡率高达75％。孕期活动感染可导致胎儿畸形，因此HCMV早期检测具有重要的临床意义。 临床上诊断HCMV早期和近期感染主要依据ELASA检测IgM抗体，检测试剂的稳定性和特异性决定着检测结果的可靠性，因此要求所包被的抗原具有抗原性强、特异性好的特点。目前国内临床采用的试剂盒基本为国产试剂，一般用细胞增殖病毒的方法获取抗原。由于病毒生长和抗原表达的差异，再加上混有成纤维细胞成分，易导致检测结果不一致和假阳性。 随着基因工程技术的发展，基因工程抗原逐渐代替传统的抗原广泛的应用于各种检测。基因工程抗原结构单纯，性质稳定在检测中可以避免提高反应的敏感性，特异性，稳定性并且易于标准化，更为安全。但由于一直未能找到具有较强的IgM反应原性和特异性的抗原，检测HCMV的ELISA试剂国内一直没有被基因工程抗原完全取代。 该项研究的主要目的是用基因工程方法表达HCMV抗原性较强并且具有IgM特异性反应的蛋白片段，以重组抗原代替传统的病毒检测抗原，以提高检测的特异性，敏感性，降低检测成本，促进病毒检测的发展。 方法： 根据genebank所查的HCMVPP150基因和相关文献选取IgM特异性反应的基因片断，全基因合成后构建克隆载体，PCR扩增目的基因，将PCR产物切胶回收后与pET-30a载体连接，转化DH5α，筛选。对阳性菌落测序后将带有目的基因的质粒转入BL21菌株IPTG诱导表达，SDS-PAGE检测蛋白的表达，用westen方法鉴定蛋白抗原性，纯化抗原用交叉连续稀释分析法滴定抗原滴度，然后包被酶标板制作试剂盒，与传统抗原制做的试剂盒、PCR试剂盒比较其阳性符合率、阴性符合率，并用新制作的试剂盒对献血员血清标本进行检测，初步分析了济南地区血库供血HCMV污染概况。 结果： 1、工程菌表达的目的蛋白具有预期抗原活性。 2、用基因工程抗原制做的试剂盒与传统抗原制作的试剂盒比较：阳性符合率80％，阴性符合率96.67％；与PCR试剂盒比较：阳性符合率96.67％，阴性符合率86.67％。基因工程抗原制做的试剂盒与PCR试剂盒有较高的阳性符合率，比传统抗原制作的试剂盒特异性较高。表明基因工程抗原试剂盒敏感特异。稳定性试验结果表明研究建立的试剂盒稳定可靠，易于4℃长期存放、相对较高温度的短期存放(如运输等)，利于推广使用。 3、济南地区献血员HCMV感染率是2.59％，表明血库供血有少部分HCMV污染，加强输血安全管理，输血前进行HCMV检测是很有必要的。 结论： 1、用基因工程抗原HCMVPP150制备的试剂盒敏感特异、稳定可靠，易于推广。 2、济南地区供血有一定程度的HCMV污染。