肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)的含量与肉品质呈正相关,直接影响着肉质的嫩度,是肉质指标中的重要参数。在动物机体内,体内脂肪是动态平衡的过程,体脂含量的多少取决于脂肪合成和脂肪分解的相对速度。据报道,脂肪因子Chemerin在3T3-L1细胞中调节脂肪形成和葡萄糖体内平衡,是调节脂肪沉积量的重要因素,但大多数研究都是围绕着小鼠脂肪细胞的代谢与分化过程,关于Chemerin在反刍动物肌内脂肪细胞代谢与分化过程中作用机制的研究较少。本研究拟以牛肌内脂肪细胞(bovine intramuscular adipocytes,bIMAs)为试验材料,研究 Chemerin 在bIMAs新陈代谢和肌内脂肪细胞分化中的作用。1.牛肌内脂肪细胞的原代培养在本试验中,我们采用三种方法分离牛肌内前体脂肪细胞,建立一种更为纯净的牛肌内前体脂肪细胞模型。结果表明,组织块培养法与天花板培养法获取细胞较传统消化法周期长,传统消化法获取细胞时间较短,但是杂细胞较多。通过油红O染色显示,组织块培养法与传统消化法获取的牛肌内前体脂肪细胞分化率较低,而天花板培养得到的牛肌内前体脂肪细胞分化率较高,细胞较纯净。这些结果表明,天花板培养法是一种高纯度、高分化率的牛肌内前体脂肪细胞模型建立方法。2.Chemerin介导ERK1/2信号通路调控牛成熟脂肪细胞脂解代谢的影响本试验中,牛肌内成熟脂肪细胞在含有Chemerin的培养基中培养至第8天后,对成熟脂肪细胞的脂肪分解以及去分化为前体脂肪细胞的过程进行了研究。结果表明,Chemerin组细胞与对照组相比Glycerol与FFA水平显著升高。脂解第4天,脂解关键因子HSL,LPL和Leptin的基因表达上调。同时,脂肪形成相关因子PPARy,C/EBPα和A-FABP的表达在成熟脂肪细胞的脂解或去分化过程中显著降低。为进一步探讨Chemerin对牛肌内成熟脂肪分解作用的影响,本试验选取4天进行肌内成熟脂肪分解作用机制研究。试验分为对照组、Chemerin组、Chemerin+U0126组。结果显示Chemerin处理组脂肪细胞Glycerol和FFA释放显著增加。抑制剂U0126抑制ERK1/2通路后,Chemerin组脂肪细胞Glycerol和FFA释放显著降低。此外,在Chemerin处理的细胞中TG的含量相对于对照组显着降低,而抑制剂添加后,逆转了这一效果。同时,在脂肪细胞脂解期间,Chemerin上调HSL,LPL,PPARα的基因和蛋白的表达,但其表达水平也被ERK抑制剂逆转。有趣的是,结果表明,Chemerin降低脂肪形成关键因子的表达,包括PPARy和C/EBPα,进一步证明了Chemerin的促脂解作用。这些数据支持Chemerin促进成熟脂肪细胞中的脂解涉及ERK1/2途径的活化,表明ERK1/2信号通路介导Chemerin对牛肌内成熟脂肪细胞的脂解作用。3.Chemerin对牛肌内前体脂肪细胞分化的作用以牛肌内前体脂肪细胞作为本试验的试验材料,旨在探讨脂肪自分泌因子Chemerin对牛肌内前体脂肪细胞分化的作用机制。含有Chemerin的培养基连续培养前体脂肪细胞4天和8天。在肌内前体脂肪细胞分化期间,油红O染色及量化结果显示Chemerin能促进细胞脂滴的形成。Chemerin组脂肪细胞内TG,TCH的含量随着分化时间显著增加。此外,Chemerin处理组PPARy,C/EBPα和A-FABP的基因和蛋白表达在前脂肪细胞分化期间显著上调。这些结果表明,Chemerin促进肌内前体脂肪细胞分化并诱导脂肪形成,进一步表明Chemerin在反当动物中肌内脂肪沉积中具有重要作用。