【摘 要】
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基质金属蛋白酶是一类能降解细胞外基质的蛋白水解酶,可促进恶性肿瘤的侵袭、转移及肿瘤间质血管新生,而基质金属蛋白酶抑制剂可以特异地抑制金属蛋白酶,该实验通过RT-PCR的
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基质金属蛋白酶是一类能降解细胞外基质的蛋白水解酶,可促进恶性肿瘤的侵袭、转移及肿瘤间质血管新生,而基质金属蛋白酶抑制剂可以特异地抑制金属蛋白酶,该实验通过RT-PCR的方法得到金属蛋白酶抑制剂3即TIMP-3的全长cDNA,构建了pcDNA-TIMP<,3>、pECFP-TIMP<,3>两个重组真核表达载体,并利用脂质体介导转染法转染入乳腺癌细胞MCF-7,通过荧光显微镜观察、Western blot法测定重组TIMP<,3>蛋白表达情况.并采用酶谱分析、MTT法、软琼脂克隆形成实验、Boyden小室、NIH3T3单层细胞侵袭实验测定转染了重组载体的MCF-7细胞的MMP-2表达及细胞生长、增殖和侵袭情况,从而在体外探讨TIMP-3对于乳腺癌细胞侵袭的影响.我们还将转染后的乳腺癌细胞接种于裸鼠,进一步探讨TIMP-3对肿瘤生长、侵袭和转移的抑制作用.该研究首次利用分子克隆的方法探讨了人TIMP-3对乳腺癌细胞MCF-7生长、增殖和侵袭的影响及意义,并提出TIMP-3可通过抑制肿瘤新生血管而抑制肿瘤的生长和侵袭.该文还首次将转染了TIMP-3重组载体的乳腺癌细胞MCF-7接种于裸鼠,动态地观察重组TIMP-3作用下的肿瘤生长、侵袭和转移情况.总之,该论文采用分子克隆的方法,利用体外、体内相结合的实验方法,较完整系统地研究了TIMP-3在乳腺癌细胞侵袭和转移过程中所起的作用,对于了解乳腺癌的早期侵袭和转移提供可靠的实验基础及理论依据.
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