背景巫山淫羊藿来源于小檗科植物巫山淫羊藿（Epimedium wushanense T.S.Ying）的干燥叶,为常用中药。目前巫山淫羊藿的繁殖方式主要为采集野生品进行分株繁殖。由于巫山县境内存在与巫山淫羊藿易混淆的品种,如:拟巫山淫羊藿、直距淫羊藿、箭叶淫羊藿等,按《药典》记录不能将这些易混品与巫山淫羊藿区分开,进而对正品巫山淫羊藿的采集和人工栽培非常不利。同时,药农采集巫山淫羊藿的方式极不规范,甚至出现破坏性采挖,如:带根采收、植物花期采收等,对巫山淫羊藿的野生资源造成了极大的威胁。因此,巫山县科技局委托本课题组对该县野生巫山淫羊藿的植物特征、主要成分随采收时间的变化规律以及不同炮制方法对巫山淫羊藿主要成分含量的影响进行研究。以便指导当地药农科学采集野生巫山淫羊藿正品,进行规范化的分株繁殖和确定合理的药材采收时间、采集方法,以及选择合适的炮制技术。目的采集正品野生巫山淫羊藿并且详细记录其生境信息,总结其植物性状的典型特征,从而指导当地农户辨认巫山淫羊藿;确定巫山淫羊藿的最佳采收期,进一步明确单株药材不同部位主要成分的含量分布规律;确定巫山淫羊藿适宜的栽培环境;研究不同炮制方法对主要成分含量的影响。方法1.巫山淫羊藿的植物性状及生境首先在巫山县科委的协助下,在官阳镇和骡坪镇进行样品的采集、照片的拍摄,以及信息的详细记录。对巫山淫羊藿的植物来源、特征进行初步考察,记录巫山淫羊藿的主要性状特征以及生境。2.巫山淫羊藿主要成分含量研究在该县官阳镇、骡坪镇,按照不同采集时间（从1月到12月）,海拔高度（500-800m、800-1100m）采集巫山淫羊藿样品,然后用高效液相色谱仪分析朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ五种主要成分含量。以朝藿定C为主要指标,以其他4种成分为辅助指标,对巫山淫羊藿主要成分变化规律进行分析总结。主成分含量测定方法主要参照2015年版《中国药典》巫山淫羊藿含量测定方法进行朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ的5种化学成分的同时测定。色谱柱为Sepax HP-C18（4.6×250mm,5 μm）,流动相为乙腈和水,检测波长为270nm,流速1.0ml/min,柱温25℃,进样量10 μl。采用梯度洗脱模式,流动相为乙腈和水,0～30min乙腈从25%线性升至30%,30～60min乙腈从30%线性升至75%,60～75min乙腈从75%线性升至100%,75～90min从100%降到25%。进而测定不同采收期,不同用药部位,不同海拔巫山淫羊藿五种黄酮类化合物的含量。3.不同炮制方法对巫山淫羊藿黄酮类化合物的影响根据2015年版《中国药典》及《中药炮制》,制备巫山淫羊藿清炒品、盐炙品、酒炙品、羊脂油炙品,采用HPLC梯度洗脱方法,测定5种黄酮类化合物的含量,并且将炮制品与生品进行含量比较。将不同方法炮制的样品,采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004版）进行共有峰的确认和相似度评价。运用SPSS20.0统计分析软件,采用Ward法、以平方Euclidean距离为度量标准,对炮制品进行聚类分析。结果1.巫山淫羊藿植物性状及生境巫山淫羊藿为多年生常绿草本,根状茎结节状,质地坚硬,多须根,为三出复叶,小叶片披针形,叶边缘具刺齿,叶下面呈灰白色。圆锥花序顶生,花梗具腺毛,花淡黄色。野生巫山淫羊藿多见于阴、湿的沟谷,坡地或林缘地带,坡向多为北坡、东北坡,土壤腐殖质含量较高,一般略偏酸性。群落结构主要有:①草本伴生型;②灌木+草本型;③乔木+灌木+草本型。2.不同月份巫山淫羊藿黄酮类化合物含量变化在该色谱条件下,朝霍定A在0.031～60.0 μg/mL（r=0.9997）浓度范围内,朝藿定B在0.020～38.0μg/mL（r=0.9998）浓度范围内,朝藿定C在0.126～240.0μg/mL（r=0.9997）浓度范围内,淫羊藿苷在 0.031～60μg/mL（r=0.9997）浓度范围内,宝藿苷Ⅰ在0.004～4μg/mL（r=0.9998）浓度范围内,各对照品的进样量与所对应的峰面积具有良好的线性关系且各黄酮类化合物理论塔板数、分离度、以及拖尾因子均达到药典要求。表明该方法适用于五种黄酮类化合物的分离及含量检测。含量测定结果表明,巫山淫羊藿叶中朝藿定C含量出现两个高峰,分别在6月,10月,淫羊藿苷在4月,5月。总黄酮含量（5种成分）合计在5月、6月、10月含量最高。参考植物叶类药材的采收原则,巫山淫羊藿宜在7～8月份采收。3.不同海拔高度巫山淫羊藿黄酮类成分含量变化对生长海拔在500-800m与800-1100m的巫山淫羊藿进行含量分析,发现朝藿定C,淫羊藿苷在海拔为1100m左右时,这两种成分含量较高,均分别高出0.148%,0.041%,差别不显著。4.不同部位巫山淫羊藿黄酮类成分含量变化不同药用部位的5种黄酮类化学成分含量均存在显著差异,朝藿定C含量大小为:根＞叶＞茎。淫羊藿苷含量大小为:叶＞根＞茎。朝藿定A（B）含量大小为:叶＞根＞茎。宝藿苷Ⅰ含量大小为:叶＞根＞茎。5.不同炮制方法对巫山淫羊藿黄酮类化合物的影响巫山淫羊藿清炒品,盐炙品,酒炙品,羊脂油炙品与生品相比,其朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C含量均有降低的趋势,而淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ均有升高的趋势。通过聚类分析结果发现,可以将不同炮制品聚为三类。根据相似度结果表明:不同的炮制方法对巫山淫羊藿黄酮类化学成分含量影响较大,但对其化学成分的种类影响较小。结论1.巫山淫羊藿的显著特征为花是淡黄色,这是区别于其他易混淆种的独有特征。在野外采集样品时除了考虑“披针型”的典型叶片特征外,还需结合“淡黄色花”的特征用来甄别巫山淫羊藿。在栽培巫山淫羊藿时,应注意遮阴,选择土壤腐殖质含量较高的土壤,还可结合实际情况,推广果林套种的方式提高经济效益及施用有机肥。2.巫山淫羊藿海拔越高越利于黄酮类化合物有效成分的积累,栽培时应尽量选择较高海拔区域。3.巫山淫羊藿最佳采收时期为7～8月,采收方式以割取叶片为宜。4.巫山淫羊藿朝藿定C在根中含量最高,但药典规定须以叶片入药,带根采收的方式对资源破坏太大,应明令禁止。5.巫山淫羊藿不同炮制品中有效成分含量显著不同,提示不同炮制品的药效存在差异,应根据实际需求选择合适的炮制方法。