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目的:研究PKHD1基因表达与大肠癌的关系,为探讨大肠癌发病分子机制提供新的实验依据。方法:本研究选用大肠腺癌组织及配对癌旁粘膜组织、人大肠癌细胞系Sw480、Caco-2、Cw2及人永生化结肠上皮细胞NCM460为研究对象。采用免疫印迹法,分别检测大肠组织及细胞系中PKHD1基因表达;构建p LKO.1-sh RNA-PKHD1慢病毒干扰载体,转染NCM460细胞,G418筛选,建立PKHD1基因稳定低表达的NCM460细胞(p LKO.1-sh RNA-PKHD1-NCM460);运用实时荧光定量PCR、免疫印迹及免疫组织化学方法,从m RNA及蛋白质水平,检测p LKO.1-sh3RNA-PKHD1-NCM460细胞PKHD 1表达,施用Transwell实验,检测PKHD1低表达NCM460细胞侵袭及迁移能力的改变。结果:Western blot结果显示:PKHD1在癌旁大肠粘膜和NCM460细胞系中表达,但在大肠腺癌组织及人大肠癌细胞系Sw480、Caco2和Cw2中表达水平降低。经双酶切、测序鉴定、BLAST在线比对,目的基因的干扰质粒与设计的干扰序列完全吻合,荧光显微镜观察转染组携带绿色荧光细胞数达80%以上;RT-q PCR、Western blot和细胞免疫组化结果显示:干扰组PKHD1m RNA和蛋白表达下降,明显低于空白组和对照组,确定PKHD1稳定低表达的p LKO.1-sh3RNA-PKHD1-NCM460细胞系成功建立。Transwell实验细胞计数结果显示:p LKO.1-sh3RNA-PKHD1-NCM460细胞系的迁移细胞数(232.67±12.36)高于对照组(66.14±9.28)和空白组(58.22±9.79),差异有统计学意义(P<0.05);p LKO.1-sh3RNA-PKHD1-NCM460细胞系穿过基质膜的细胞数(182.53±11.36)也显著高于对照组(47.23±7.36)和空白组(46.73±7.93),表明下调PKHD1的表达能增强NCM460细胞的迁移、侵袭能力。结论:1.PKHD1基因在大肠腺癌组织及癌细胞系中低表达;2.敲低PKHD1的表达能增强NCM460细胞的迁移、侵袭能力。