猪圆环病毒3型Cap蛋白表达及免疫效力初步评价

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猪圆环病毒3型(缩写PCV3)作为一种新发病毒,自2016年首次报道以来,被认为与猪的多种临床疾病相关,呈世界范围内流行。我国是世界养猪业和猪肉消耗量最大的国家,比例占据全球一半以上,随着我国养猪业的不断发展,养殖规模越来越大,随之而来的疾病也越复杂。目前我国猪群中的PCV3感染广泛存在,但对其致病力,流行病学研究以及分子生物学研究等处于初步研究阶段。尤其是预防疫苗方面上存在空白,仍无商品化疫苗可用。因此本研究结合PCV3的国内流行特点,构建PCV3a Cap重组蛋白,结合不同的佐剂评估PCV3a Cap蛋白的免疫效果,为猪圆环病毒3型的诊断和疫苗研究奠定初步基础。首先对国内的某规模化猪场开展PCV3的流行病学调查,分析PCV3流行特点及主要基因型,并以优势基因型为基础表达猪圆环病毒3型的重组Cap蛋白,经层析纯化获得高纯度的PCV3a Cap蛋白,最后结合不同的佐剂将PCV3a Cap蛋白免疫仔猪,结合抗体水平初步评价猪圆环病毒3型Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效果。流行病学调查分析结果显示,国内某规模化猪场PCV3的阳性率为14%,基因亚型均为PCV3a型。SDS-PAGE和Western-Blot结果显示,大肠杆菌表达系统成功表达了PCV3a Cap蛋白,层析纯化获得了纯度为92%的PCV3a Cap重组蛋白。结合佐剂ISA15VG、ISA251CVG、Gel02和IMS1313VG分别制备了PCV3a亚单位疫苗,小鼠和仔猪安全实验结果表明:4组PCV3a亚单位疫苗理化检验均符合疫苗生产规程要求,疫苗对小鼠的安全性高,未产生疫苗相关副反应,但对仔猪的安全性存在差异。其中IMS1313VG佐剂组疫苗对仔猪的安全性最高,其次为ISA251CVG组。疫苗的效力评估结果表明:PCV3a Cap蛋白具有很好的免疫原性,能够刺激仔猪产生抗体。其中ISA251CVG佐剂组和IMS1313V佐剂组ELISA抗体效价显著高于ISA15VG佐剂组和Gel02佐剂组。IMS1313VG佐剂组临床试验评价结果显示免疫组与对照组相比,仔猪呼吸道症状发生率由7.5%下降至5%,淋巴结中病原检出率由22.3%下降至13.8%,怀孕母猪的流产率由5.38%下降至2.35%。表明IMS1313VG佐剂组能够提供较好保护效果。综上,本研究基于国内某规模化猪场PCV3的流行病学调查研究结果的基础上表达并制备高纯度PCV3a Cap重组蛋白,结合不同的佐剂制备了PCV3a Cap亚单位疫苗,其中IMS1313VG佐剂制备的PCV3a亚单位疫苗具有良好的免疫原性,为商化PCV3亚单位疫苗的研究提供了重要的数据支持,为PCV3的综合防控奠定了基础。
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