外源性血管内皮生长因子对兔退变椎间盘中蛋白多糖影响的实验研究

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目的:研究外源性VEGF对兔退变椎间盘中PG含量的影响,探讨外源性VEGF治疗退变椎间盘的可行性。方法:将32只新西兰大白兔采用完全随机法分为两组(试验组及对照组),采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变的动物模型。2月后,行MRI检查并根据改良Thompson分级法对椎间盘退变的程度进行评价并分级,统计各退变程度的椎间盘个数。向试验组各椎间盘内注入含VEGF的BSA溶液20μl,对照组各椎间盘仅注入20μl BSA溶液。4周后,处死试验动物并取出椎间盘,采用ELISA法测定椎间盘中VEGF及PG的含量。结果:对照组中1只试验动物于建立退变椎间盘模型术后第2天死亡,其余试验动物恢复良好。(1)MRI检查结果:椎间盘退变模型建立2月后试验动物的L2/3、L3/4、L4/5及L5/6椎间盘的T2信号强度出现不同程度的下降,证明造模成功。对照组和试验组退变程度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级椎间盘的个数分别为13、23、17、7和14、25、15、10,经卡方检验,两组之间无统计学差异(P=0.886,P>0.05)。(2)VEGF检测结果:对照组中,退变程度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级椎间盘中VEGF的量分别为122.29±42.80ng/L、124.51±31.68ng/L、128.59±27.65ng/L、48.77±28.20ng/L,经方差分析,退变程度为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的椎间盘中VEGF含量无统计学差异(P>0.05),退变程度为Ⅳ级的椎间盘与其他退变程度的椎间盘中VEGF含量有统计学差异(P<0.05),退变程度为Ⅳ级的椎间盘中VEGF含量较其他低。试验组退变程度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级椎间盘中VEGF的量分别为154.87±30.56ng/L、148.86±24.67ng/L、163.46±26.71ng/L、55.15±20.04ng/L。其中,经过多重比较,不同退变程度的椎间盘中VEGF含量有统计学差异(P=0.000,P<0.05);退变程度为Ⅳ级的椎间盘与其他退变程度的椎间盘VEGF含量有统计学差异,Ⅳ级低于其他三级(P=0.000,P<0.05)。(3)PG检测结果:对照组中,退变程度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级椎间盘中PG的统计量分别为136.44±28.40ng/L、87.57±18.62ng/L、64.33±21.88ng/L、21.96±9.63ng/L。经方差分析,PG含量有统计学差异(P=0.000,P<0.05),可以认为不同退变程度的椎间盘PG含量不同,随着退变程度的加重,椎间盘中PG含量呈下降的趋势。试验组退变程度为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级椎间盘中PG的统计量分别为154.48±16.95ng/L、99.36±13.77ng/L、60.71±12.53ng/L、19.52±7.69ng/L。经方差分析,PG含量有统计学差异(P=0.000,P<0.05),可以认为不同退变程度的椎间盘PG含量不同,随着退变程度的加重,椎间盘中PG含量呈逐渐下降的趋势。(4)两组相同退变程度的椎间盘中VEGF及PG比较结果:退变程度为Ⅰ级的椎间盘中,两组VEGF含量有统计学差异(P=0.031,P<0.05),试验组较对照组VEGF含量高;两组PG含量有统计学差异(P=0.023,P<0.05),试验组PG含量较对照组高。退变程度为Ⅱ级的椎间盘中,两组VEGF含量有统计学差异(P=0.005,P<0.05),试验组较对照组VEGF含量高;同时,两组PG含量有统计学差异(P=0.016,P<0.05),试验组PG含量较对照组高。在退变程度为Ⅲ级的对照组及试验组椎间盘中VEGF含量有统计学差异(P=0.001,P<0.05),试验组较对照组VEGF含量高;两组PG含量无统计学差异(P=0.577,P>0.05)。在退变程度为Ⅳ级的对照组及试验组椎间盘中VEGF含量无统计学差异(P=0.592,P>0.05);两组椎间盘中PG含量无统计学差异(P=0.570,P>0.05)。结论纤维环穿刺法建立兔的椎间盘退变模型可操作性强、可重复性好,MRI T2信号的强度可明确、直观的反映椎间盘髓核退变的程度。根据改良Thompson分级法,当椎间盘退变程度为Ⅰ级及Ⅱ级时,外源性的VEGF可以促使椎间盘中PG的增多;当椎间盘退变程度达到Ⅳ级时,退变椎间盘中VEGF含量与PG含量出现明显降低,提示此时椎间盘已严重纤维化,纤维环中的血管可能有缺血、萎缩甚至闭锁。因此,在椎间盘退变初期,及时予以外源性的VEGF以增加椎间盘中VEGF的浓度,可以促使PG的增多,可能达到延缓甚至治疗椎间盘退变的目的。
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