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第一部分OSAHS患者载脂蛋白B/载脂蛋白A-I、胰岛素抵抗及十年心血管疾病发病高风险的相关性研究目的:载脂蛋白B/载脂蛋白A-I(apolipoprotein B/apolipoprotein A-I,APOB/APOA-I)异常和胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)常见的危险因素。阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者APOB/APOA-I异常、IR、CVD发生率高,而OSAHS患者中APOB/APOA-I、IR及CVD之间的相互关系却鲜有报道。本研究拟通过探讨OSAHS、APOB/APOA-I、IR间的相互关系,分析其与十年心血管疾病发病高风险的关系。方法:本研究收集2009年7月至2017年10月期间在上海交通大学附属第六人民医院睡眠中心就诊的6433例受试者的临床资料,包括空腹血糖、胰岛素、血脂等生化指标,标准睡眠呼吸监测指标、人体测量学指标、生活习惯等数据,并计算每位受试者的Framingham十年心血管疾病风险评分(Framingham 10-year cardiovascular disease risk score,FRS),其概率大于20%认为是十年心血管疾病发病高风险人群。经严格筛选,最终共有4010例受试者纳入本次研究。采用限制性立方条图方法(restricted cubic spline,RCS)分析呼吸暂停低通气指数(apnea hypopnea index,AHI)与APOB/APOA-I,IR与APOB/APOA-I的非线性关系。采用中介性分析分别量化IR作为中介因素在AHI、氧降指数(oxygen desaturation index,ODI)、微觉醒指数(micro-arousal index,MAI)与APOB/APOA-I关系中所起的中介效应。采用二元logistic回归分析APOB/APOA-I、HOMA-IR、AHI与十年心血管疾病发病高风险的关系。结果:RCS分析结果表明APOB/APOA-I与IR、AHI存在非线性剂量效应关系。中介分析结果显示,IR作为中介效应,分别解释了9.7%、4.7%和10.8%的AHI、ODI、MAI与APOB/APOA-I比值之间的相关性。logistic回归分析发现患有AHI、HOMA-IR、APOB/APOA-I皆是十年心血管疾病发病高风险的危险因素,比值比(Odds ratio,OR)分别为1.010,1.094,5.365,P均<0.001。结论:APOB/APOA-I与IR、AHI存在非线性量效关系。IR可能是OSAHS引起的APOB/APOA-I异常的中介因素,且APOB/APOA-I、IR、OSAHS均是十年心血管疾病发病高风险的危险因素。第二部分OSAHS患者载脂蛋白常见基因变异与胰岛素抵抗、代谢综合征的关系目的:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)与血脂代谢紊乱密切相关,而血清载脂蛋白A-I(APOA-I)和载脂蛋白B(APOB)水平与胰岛素抵抗(IR)、代谢综合征(metabolic syndrome,Met S)相关。APOA-I、APOB水平受到多个相关基因变异的的共同影响,然而相关基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的累积效应对IR、Met S的影响尚不清楚。本研究通过大样本的基因关联分析,采用遗传风险评分(genetic risk score,GRS)模型研究APOA-I和APOB相关基因的SNP变异的累积效应与OSAHS患者的IR、Met S发生的关系。方法:收集2007年1月-2018年1月期间在上海交通大学附属第六人民医院睡眠中心就诊的5259例受试者的临床资料,包括空腹血糖血脂等生化指标、睡眠呼吸监测指标、人体测量学指标、生活习惯等数据,并对入选个体采用全基因组芯片进行基因分型,提取12个APOA-I基因相关的SNP和30个APOB基因相关的SNP,经过严格筛选,最终纳入包含4个APOA-I SNP,5个APOB SNP的4007例样本,其中非OSAHS 596例,中度OSAHS 831例,重度OSAHS 2580例。根据风险等位基因个数及对应的影响效应值计算每例样本的APOA-I、APOB SNP基因变异的累积效应即遗传风险评分(GRS)。采用二元logistic回归模型分析APOA-I、APOB单个SNP以及GRS与IR、Met S的患病风险;依据APOA-I和APOB的GRS进行五分位间距分组,比较最高和最低组的IR、Met S的患病风险。多元线性回归分析APOA-I和APOB基因变异的GRS与各临床指标的相关性。结果:二元logistic回归分析发现,在校正年龄、性别、体质指数(BMI)后,APOA-I SNP rs9804646变异降低IR的发病风险(OR=0.856,P=0.013),rs888246变异增加IR的发病风险(OR=1.340,P=0.011),APOB SNP与IR无相关性(P>0.05)。APOA-I SNP rs964184、rs888246变异增加Met S的发病风险(OR=1.353 P<0.001;OR=1.271,P=0.03)。APOA-I SNP rs9804646和APOB SNPrs2854725变异降低Met S的发病风险(OR=0.777,P<0.001;OR=0.829,P=0.01)。多变量logistic回归分析发现,在校正了年龄、性别、体质指数(BMI)后,APOB/APOA-I、APOB是IR发生的独立风险因素(OR=2.285,3.168,P均<0.001);而APOA-I GRS是IR的保护性因素(OR=0.917,P<0.001)。同样,在校正年龄、性别、BMI后,APOB/APOA-I、APOB显著增加Met S的患病风险(OR值=14.488,6.098,P均<0.001)。APOA-I GRS、APOA-I显著降低Met S的患病风险(OR=0.87,0.09,P均<0.001)。与第一分位的APOA-I GRS相比,第五分位的人群患IR和Met S的风险降低(OR=0.761,0.637,P均<0.001)。线性回归分析发现APOA-I GRS与HOMA-IR、甘油三酯、低密度脂蛋白、APOA-I、APOB/APOA-I相关(P<0.05)。APOB GRS与总胆固醇、低密度脂蛋白、APOB、APOB/APOA-I相关(P<0.05)。结论:APOA-I基因SNP变异的累积效应与OSAHS人群的IR和Met S发生有关。APOA-I和APOB的GRS与多个代谢组分相关。第三部分ANGPTL4和8与男性OSAHS血脂紊乱的相关性研究目的:男性OSAHS患者的血脂紊乱明显,具体机制不清。血管生成素样蛋白(Angiopoietin-like protein,ANGPTL)4和8通过抑制脂蛋白脂肪酶活性从而调节脂类代谢,ANGPTL4和ANGPTL8是否参与OSAHS患者血脂紊乱尚未有研究报道。本研究拟通过ANGPTL4,8在OSAHS患者血清学水平与血脂的相关性分析以及ANGPTL4,8功能单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)变异位点对血脂的影响,探讨其与男性OSAHS患者血脂紊乱的关系。方法:从2007年1月-2018年1月期间在上海交通大学附属第六人民医院睡眠中心就诊并采用全基因组芯片进行基因分型的受试者中选取4455名包含ANGPTL4 SNP T266M和ANGPTL8 SNP R59W及血糖血脂生化指标、人体测量学指标、睡眠呼吸监测指标等资料的男性受试者。并从中选取严格年龄、BMI匹配的男性158例非OSAHS、145例中度OSAHS、164例重度OSAHS患者,行血清ANGPTL4和ANGPTL8 Elisa水平检测。ANOVA方法比较各组ANGPTL4和ANGPTL8血清水平的差异。相关性方法分析ANGPTL4和ANGPTL8水平与血脂水平的相关性。相关性方法分析ANGPTL4 T266M和ANGPTL8 R59W变异与OSAHS血脂水平的相关性。卡方检验分析T266M、R59W变异与血脂异常的风险关系。运用分子动力学模拟方法分析T266M和R59W野生型和变异体蛋白质分子构象改变以及蛋白表面电荷分布的差异。结果:非OSAHS、中度OSAHS、重度OSAHS血清ANGPTL4水平差异无统计学意义(P=0.392),ANGPTL8水平差异有统计学意义(P=0.006)。相关性分析发现,血清ANGPTL4水平与与血脂水平、睡眠呼吸指标均无相关性(P>0.05);血清ANGPTL8水平与TG、APOB正相关(?=0.103,P=0.026;?=0.109,P=0.018);与AHI、ODI、MAI睡眠呼吸指标正相关(?=0.14,P=0.003;?=0.132,P=0.005;?=0.111,P=0.017)。基因多态性分析发现R59W与总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、APOA-I、载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)负相关(?=-0.044,P=0.003;?=-0.032,P=0.034;?-0.074,P<0.001;?=-0.089,P<0.001;?=-0.047,P=0.002)。T266M与肥胖指标、血糖、血脂水平均无明显相关性(P>0.05)。R59W变异增加HDL-C、APOA-I异常的风险(OR=1.221,P=0.001;OR=1.369,P<0.001),降低TC异常的风险(OR=0.808,P=0.001)。T266M变异与血脂紊乱无相关性(P>0.05)。运用Gromacs v5.0.2软件进行分子动力学模拟发现,ANGPTL4 T266M变异体结构势能低,比野生型稳定,且T266M变异体蛋白与野生型相比表面电荷分布差别不大。ANGPTL8 R59W变异体蛋白能量高于野生型,相比野生型更不稳定,并且R59W变异体蛋白表面跟野生型相比正负电荷的空间位置发生明显改变。结论:血清ANGPTL8水平与OSAHS的严重程度相关,ANGPTL8 R59W变异与OSAHS患者脂类水平及血脂紊乱有关,可能与ANGPTL8 R59W变异导致蛋白体结构不稳定、电荷分布变化有关,而ANGPTL4水平及ANGPTL4 T266M变异无此相关性,因此推测ANGPTL8 R59W变异是导致OSAHS血脂紊乱的重要位点。