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大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)是引起奶牛乳腺炎的一种重要病原菌,并可引起奶牛乳腺纤维化,患牛泌乳量降低,甚至乳腺失去泌乳功能而导致奶牛淘汰。奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)是乳腺组织中主要间质细胞,研究大肠杆菌对体外培养奶牛乳腺成纤维细胞相关因子和受体表达及其信号转导途径的影响,对奶牛乳腺纤维化的防治具有重要意义。本研究采用奶牛乳腺炎源性热灭活的E.coli (0 CFU/mL、105CFU/mL、106 CFU/mL和108CFU/mL)作用于体外培养的BMFB,于不同的时间点(6h、12 h、24 h和48 h)提取细胞的总mRNA和总蛋白,采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)和Western-blot方法检测TLR2、TLR4的mRNA和蛋白表达水平；采用Western-blot方法检测核转录因子NF-κB和AP-1的蛋白表达水平；采用RT-PCR和Western-blot方法检测促纤维化细胞因子TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体TβRI、FGFR2、 PDGFRβ的mRNA口蛋白表达。结果表明：(1)不同浓度的热灭活E. coli菌液在不同的时间点均可以显著促BMFBTGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体TβRI、FGFR2、PDGFRβ的mRNA和蛋白的表达。BMFBTGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体TPRI、FGFR2、PDGFRβ的mRNA的表达呈正时效关系,E. coli的作用早期mRNA表达量呈升高趋势,随着作用时间延长mRNA表达量升高趋势逐渐减弱；各因子及其受体的蛋白表达均是随着作用时间延长而升高,但是在作用后期升高趋势降低,呈正时效关系。(2)不同浓度的热灭活E. coli菌液作用于BMFB,在不同的时间点均可以显著促进BMFB TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表达,且呈正时效性。TLR2 mRNA和蛋白表达水平显著升高,并且TLR2 mRNA和蛋白的表达呈时效性和量效性,于48 h达到最高(P<0.05)。TLR4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,并且TLR4 mRNA和蛋白的表达呈时效性和量效性,分别于24 h和12h达到最高后逐渐下降(P<0.05)。(3) E.coli也显著促进了BMFB p-NF-KB-p65和p-c-jun蛋白的表达,基本呈正时效关系。p-NF-KB-p65的表达与大肠杆菌作用浓度呈现正量效关系,表达量随作用时间延长先升高后逐渐降低,于12h达到高峰后逐渐下降(p<0.05)。AP-1的表达与大肠杆菌作用浓度呈现正量效关系,表达量随作用时间延长先升高后逐渐降低,于24h达到高峰后逐渐下降(p<0.05)。综上所述,热灭活的E. coli可以促进体外培养的BMFB的TGF-β1、bFGF、 PDGF-BB、TGFβRI、FGFR2和PDGFRβ mRNA和蛋白的表达,并且呈一定的时效与量效关系。热灭活的E. coli可以促进体外培养的BMFB TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表达,并且呈现一定的时效关系。TLR2和TLR4均参与了E. coli对BMFB的作用。热灭活的E. coli可以促进体外培养的BMFB p-NF-κB-p-65和p-c-jun蛋白的表达。E. coli对BMFB可通过激活NF-κB和AP-1信号转导途径产生并分泌促纤维化细胞因子。