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天然酶是生物传感中的分子识别元件,相比较于其他催化剂有作用条件温和,催化高效性,专一性强等独特的优势,但同时易失活,价格昂贵等特点也使得天然酶的使用受到很大的限制。模拟酶具有与天然酶相同的催化性质,同时以其价廉易得的优势得到很多研究者们的青睐。然而,模拟天然酶材料合成过程繁琐,模拟天然酶级联反应研究需要进一步加强。传统的酶级联反应局限于前一步酶促反应产生后一步酶促反应的底物,这就使得酶级联反应在实际应用过程中受到很大的限制。本文研究了新型的基于天然酶促反应触发产生模拟酶的酶级联反应体系,突破了产物/底物的限制,为级联反应的应用提供了广阔的空间。具体研究内容如下:(1)天然酶酸性磷酸酶(ACP)触发反应合成的普鲁士蓝纳米粒子(PBNPs)具有模拟过氧化物酶活性,它能在H2O2的存在下催化氧化经典显色底物TMB。焦磷酸根(PPi)能较强的结合Fe3+阻碍模拟酶PBNPs的生成,进一步影响底物氧化情况。酸性条件下,PPi被ACP水解,水解后的产物对模拟酶的产生没有明显的影响。基于此原理,我们建立了一种新型的酶级联反应传感体系,并将其应用于超灵敏检测ACP。(2)天然酶ACP触发反应合成的亚铁氰化汞(Hg2[Fe(CN)6])具有较高的模拟过氧化物酶活性,能在较低的H2O2浓度下催化氧化底物TMB。同时,实验发现ACP水解PPi反应能触发模拟酶Hg2[Fe(CN)6]的生成。基于天然酶与纳米材料模拟酶Hg2[Fe(CN)6]的耦合作用,我们建立了一种多功能的酶级联反应传感体系,这种多功能酶联传感体系具有双重信号放大作用,可以用于葡萄糖和ACP的高度灵敏检测。反应溶液的吸收强度随着被测物ACP浓度的增加而增加,吸光度变化值与浓度在0.03-50U/L范围内的ACP呈线性相关,检测限为0.007 U/L。(3)常见小分子物质铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])在可见光照射下具有模拟辣根过氧化物酶(HRP)的活性,能氧化显色底物TMB。PPi能较强的抑制K3[Fe(CN)6]的模拟酶活性,导致底物的氧化程度降低,溶液吸光度减小。基于碱性条件下碱性磷酸酶(ALP)能通过水解PPi反应对K3[Fe(CN)6]模拟酶活性起到调节作用,我们建立了一种新型的酶级联反应传感体系,并将它用于免疫分析检测癌胚抗原(CEA)。