【摘 要】
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参与脂肪细胞的分化是miRNA最早被发现的功能之一,为了探讨miR-221-3p对家兔脂肪细胞的分化是否有调控作用,试验以家兔前体脂肪细胞为试验材料,利用人工合成的miR-221-3p mimic、inhibitor及siRNA转染进细胞,检测诱导分化过程中细胞内脂滴的含量及成脂标志基因的m RNA表达水平的变化,预测miR-221-3p与靶基因之间潜在的关系,并验证SOCS3基因对家兔前体脂肪细
【基金项目】
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国家兔产业技术体系（No.CARS-44-A-2）； 优质特色兔配套系选育与育种材料创新项目（2016NYZ0046）；
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参与脂肪细胞的分化是miRNA最早被发现的功能之一,为了探讨miR-221-3p对家兔脂肪细胞的分化是否有调控作用,试验以家兔前体脂肪细胞为试验材料,利用人工合成的miR-221-3p mimic、inhibitor及siRNA转染进细胞,检测诱导分化过程中细胞内脂滴的含量及成脂标志基因的m RNA表达水平的变化,预测miR-221-3p与靶基因之间潜在的关系,并验证SOCS3基因对家兔前体脂肪细胞分化的影响。结果如下:（1）利用酶消化法成功分离培养了家兔前体脂肪细胞,诱导细胞分化9d后有大量脂质滴累积,标志基因检测符合前体脂肪细胞分化规律。分化过程中,miR-221-3p的表达量先上升后逐渐下降,对比分化前,第6、9、12d时的表达量极显著上调（P＜0.01）,且第6d时表达量最高。（2）转染miR-221-3p mimic后,细胞内miR-221-3p表达量极显著上调（P＜0.01）。诱导前体脂肪细胞分化后,mimic组前体脂肪细胞的分化被抑制,PPARγ和C/EBPα的m RNA表达水平均显著降低（P＜0.05）;转染miR-221-3p抑制剂inhibitor后细胞内miR-221-3p表达量极显著下调（P＜0.01）,inhibitor可以促进家兔前体脂肪细胞的分化,PPARγ和C/EBPα的m RNA表达水平均显著上调（P＜0.05）。说明miR-221-3p抑制家兔前体脂肪细胞的成脂分化。（3）Targetscan预测结果显示SOCS3基因是miR-221-3p的一个潜在靶基因。双荧光素酶报告实验分析结果表明,miR-221-3p能够与SOCS3基因的3’UTR区结合,极显著下调萤火虫荧光素酶的活性（P＜0.01）。（4）过表达miR-221-3p抑制SOCS3基因的表达水平,下调了约50%（P＜0.01）,而抑制miR-221-3p表达后,上调了SOCS3基因的表达水平（P＜0.01）。（5）采用人工合成的siRNA干扰细胞内SOCS3基因的表达后,SOCS3基因的表达水平下降约70%,细胞中脂质累积明显减少,PPARγ和C/EBPα的表达水平被抑制（P＜0.01）,家兔前体脂肪细胞的分化受到抑制。综上所述,miR-221-3p通过靶向下调SOCS3基因的表达来抑制家兔前体脂肪细胞的分化。
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