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猪瘟（Classical swine fever，CSF）是一种由猪瘟病毒（Classical swine fevervirus，CSFV）引起的猪病毒性传染病，各年龄段的家猪和野猪均可感染发病。猪瘟病毒是黄病毒科瘟病毒属的重要成员之一，基因组为单股正链RNA，长约为12.3kb，编码一个多聚蛋白，经后期的剪切加工形成4个成熟的结构蛋白和8个成熟的非结构蛋白。猪瘟病毒囊膜E2蛋白是诱导机体产生特异性抗体的主要蛋白，也是研究猪瘟亚单位疫苗、标记疫苗和检测方法的主要的目标蛋白。E2蛋白一直是研究的热点。E2蛋白主要由N端的信号肽、C端的跨膜区以及中间的氨基酸区域组成，通过与E1蛋白形成异源二聚体或本身形成同源二聚体在病毒囊膜上发挥其生物学作用。E2蛋白上主要有4个抗原结构域A、B、C、D，研究也证明在蛋白C端接近跨膜区处也分布有抗原结构域，这些区域是E2蛋白诱导产生抗体的主要区域。本研究通过PCR扩增了猪瘟病毒石门株囊膜E2蛋白A、B、C、D四个主要抗原区534bp的基因序列，将其克隆入pGEX-4T-1载体中，构建了表达该区域的原核表达载体pGEX-4T-1-△E2，同时为了便于下游蛋白质纯化在蛋白质C端添加了组氨酸标签。将pGEX-4T-1-△E2载体转入大肠杆菌Transetta(DE3)中进行表达，经过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测结果表明猪瘟病毒△E2蛋白以包涵体形式表达在大肠杆菌中，而且在30℃，诱导物IPTG浓度为0.1mM，诱导8h时，△E2蛋白表达效果最好。通过Ni-NTA His亲和层析柱纯化经变性处理的△E2蛋白，结果发现当咪唑浓度为250mM时蛋白纯化效果最好。利用分步透析的方法复性变性的△E2蛋白，BCA法测定蛋白浓度为0.3042mg/ml。以纯化后的△E2蛋白为包被抗原，通过条件优化，建立了猪瘟抗体间接ELISA检测方法。实验确定抗原包被量为每孔包被0.3125μg，4℃包被24h，1%BSA溶液37℃封闭2h，待检血清1:80倍稀释后37℃孵育30min，加入1:10000倍稀释的HRP标记的羊抗猪二抗37℃反应1h，TMB显色液室温避光显色10min，加入0.5mM硫酸溶液终止反应后测定450nm的OD值为猪瘟抗体间接ELISA检测方法的最佳反应条件。通过上述反应条件对29份猪瘟抗体阴性血清样品进行检测，确定当待检血清OD450值≥0.390时判断为阳性，待检血清OD450值≤0.350时判断为阴性，待检血清OD450值界于0.390~0.350之间则认为疑似，可以重新检测或重新取样再检。对建立起来的猪瘟抗体间接ELISA检测方法进行重复性实验，批内重复试验和批间重复试验的试验结果显示此方法具有很好的重复性。利用此方法对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪乙型脑炎病毒(JEV)三种猪常见疾病的抗体阳性血清进行检测，其OD450值均小于0.350为阴性，证明该方法应用于猪瘟抗体诊断时具有很好的特异性。利用此方法和IDEXX猪瘟抗体检测试剂盒分别对114份临床血清样本进行检测，符合率高于80%，证明此方法具有很好的临床应用前景，为猪瘟抗体的实时检测和猪瘟的防控奠定了基础。