木鳖子制霜工艺及炮制“减毒增效”机理初步研究

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:cedzyh
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目的木鳖子(Momordica cochinensis(Lour.)Spreng.)为葫芦科植物木鳖的干燥成熟种子,属于有毒中药,临床应用需炮制成霜。本课题旨在优化木鳖子霜的最佳炮制工艺,并分析比较木鳖子制霜前后的化学成分、急性毒性及抗肿瘤药效的差异,以此探讨木鳖子霜的“减毒增效”机理。方法1木鳖子霜的最佳工艺研究以丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯、β-谷甾醇,齐墩果酸含量及脂肪油含量的指标归一值“OD”为综合评价指标,采用三因素三水平的Box-Behnken响应面法(BBD-RSM)设计试验,考察烘制时间、烘制温度、压制时间对木鳖子霜的炮制工艺影响。2木鳖子制霜前后化学成分差异研究采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术(UPLC-QTOF-MS),通过时间依赖型的质谱数据扫描模式(MSE)采集木鳖子与木鳖子霜各9批样品的高精确度的数据,将Unifil软件与Progenesis QI软件分析数据结合,根据主成分分析(PCA)与正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)比较木鳖子制霜前后的化学成分差异。3木鳖子制霜前后急性毒性及抗肿瘤药效比较研究根据小鼠急性毒性实验方法,以概率单位法(Bliss)计算木鳖子与木鳖子霜醇提物口服的LD50,并于给药后连续14 d观察、记录各组小鼠的自主活动、精神状况及毒性反应、死亡数,实验结束处死小鼠,取肝、肾进行病理学检查。采用昆明种小鼠腋下接种H22肝癌腹水方式,建立移植性肿瘤模型。将H22荷瘤小鼠分为模型组(无菌生理盐水)、阳性CTX组(20mg/kg)、阳性复方守宫散组(1.95g/kg)、木鳖子给药组(1.65g/kg、0.55g/kg)、木鳖子霜给药组(1.65g/kg、0.55g/kg)及正常组,连续灌胃给药10天。观察荷瘤小鼠的生活状态及体质量变化,测定抑瘤率、脏器指数;ELISA法测定血清中IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α水平;HE染色观察肿瘤、肝脏组织的病理变化,免疫组化法检测肿瘤组织中bax、bcl-2蛋白表达水平。结果1木鳖子霜的最佳工艺研究根据BBD-RSM优选出木鳖子霜最佳炮制工艺条件为烘制时间1.7h、烘制温度80℃、压制时间30min。2木鳖子制霜前后成分差异研究木鳖子鉴定32种成分,木鳖子霜新增9种成分,共41个化合物。(1)新增9种成分,即oleragenin;Goyaglycoside f;Charantosides A;momordicoside U;3-O-β-D-glucofuranosidurono-6,3-lactone-gypsogenin;Karavilagenins D;daucosterol;Kuguacins K;Kuguacins O。(2)含量显著差异6种成分,MomordinsⅢ、Neokug uaglucoside、nonadec-10-enoic acid、oleanolic acid木鳖子霜更高;(9Z,11Z,13E)-o ctadeca-9,11,13-trienoic acid、KaravilosidesⅠ木鳖子更高。3木鳖子制霜前后急性毒性及H22抗肿瘤药效研究3.1木鳖子制霜前后急性毒性研究木鳖子与木鳖子霜各组小鼠均不同程度的出现自发活动减少、困倦、眼睑半闭,严重的表现强直性抽搐,直至死亡;根据Bliss法,计算出木鳖子LD50=16.777g/kg,木鳖子霜LD50=28.560g/kg。木鳖子霜毒性较木鳖子明显降低;且木鳖子霜组肝、肾组织病变程度较木鳖子组有不同程度的减轻。3.2木鳖子制霜前后的H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用研究木鳖子与木鳖子霜各组小鼠均不同程度改善H22荷瘤小鼠一般状况,提高脾脏、胸腺指数,抑制肿瘤生长,但二者之间无显著性差异;均升高血清IL-2、IL-6、IL-12与TNF-α的水平,且木鳖子霜较木鳖子(1.65g/kg)的IL-2、TNF-α水平显著升高,木鳖子霜较木鳖子(0.55g/kg)的IL-12水平显著提高;均提高肿瘤组织中bax表达,并抑制bcl-2表达从而升高bax/bcl-2比值,且木鳖子霜较木鳖子显著升高;缓解肿瘤及肝脏组织的病理学变化。结论本课题以BBD-RSM优选的木鳖子霜炮制工艺稳定可行,模型预测性良好。木鳖子与木鳖子霜化学成分存在“质”、“量”差异;木鳖子霜急性毒性明显低于木鳖子;而木鳖子霜可能通过提高IL-2、IL-6、TNF-α因子水平及调节凋亡基因bcl-2、bax水平增强其抗肿瘤疗效,初步阐明木鳖子霜的“减毒增效”机理。
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