【摘 要】
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目的:研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法:提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）原代,通过流式进行其表面抗原（CD45,CD90）的鉴定来确定纯度,接下来分别进行成骨诱导,茜素红染色检测成骨效果,成脂诱导,油红染色检测成脂效果。检测上清液外泌体标志性蛋白CD9,CD63的表达量,电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、2
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目的:研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法:提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）原代,通过流式进行其表面抗原（CD45,CD90）的鉴定来确定纯度,接下来分别进行成骨诱导,茜素红染色检测成骨效果,成脂诱导,油红染色检测成脂效果。检测上清液外泌体标志性蛋白CD9,CD63的表达量,电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、21天进行qRT-PCR测定外泌体内miR-125b及细胞内ALP、Runx2的mRNA的表达量。BMSCs侵染miR-125b mimic、inhibitor及其阴性对照（NC,inhibitor NC）,转染后转染效率验证。转染后五组（前四组+生理盐水组）细胞上清液外泌体提取,提取后与BMSCs共培养,继续成骨诱导48h,qPCR及WB分别测定BMSCs细胞ALP、Runx2、miR-125b的表达量。结果:①成功分离的BMSCs可向成脂、成骨分化;②成骨诱导分化期间,P3代BMSCs的成骨标志基因ALP的mRNA表达量明显增加,Runx2基因的表达趋势与其相同,而在上清液所提取的外泌体中,对应的miR-125b趋势相反,差异具有统计学意义（P＜0.05）,表明提取的外泌体内 miR-125b与BMSCs的成骨分化呈负相关;③转染后共培养组中模拟物组较对照组其成骨标志基因ALP、Runx2的mRNA和及ALP的蛋白表达显著下降,而抑制组较对照组其成骨基因ALP、Runx2的mRNA和ALP的蛋白表达显著上升,差异具有统计学意义（P＜0.05）。表明miR-125b通过外泌体途径抑制了 BMSCs的体外成骨分化。结论:骨髓间充质干细胞来源miR-125b能通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。
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