肿瘤细胞的染色体数目畸变,又称染色体不稳定（chromosomal instability,CIN）,是肿瘤细胞的特征性改变之一。以往由于对正常细胞染色单体分离机制认识有限,所以尽管人们很早就发现肿瘤细胞的染色体数目异常,但对其发生机制一直缺乏深入研究。近年来,姐妹染色单体分离机制的研究有了较大进展,目前已知:姐妹染色单体分离主要由分离酶控制,分离酶（separase/ESP1）活性受到保全素（securin/PTTG）的抑制;在有丝分裂后期,后期促进复合物（anaphase-promating complex,APC）降解保全素,导致分离酶活化、水解粘合素（cohesin/SCCl）,姐妹染色单体在着丝粒处发生分离,进而移向两极,分配到两个子代细胞中。上述过程在肿瘤细胞中有何变化及它与肿瘤细胞染色体数目畸变有无联系至今未见有系统研究。本研究拟通过观察姐妹染色单体分离相关基因在肿瘤细胞A549、SPC-A-1细胞周期不同时相的表达模式探讨上述姐妹染色单体分离机制与肿瘤细胞染色体数目畸变的可能关系。 实验目的: 观察参与肿瘤细胞姐妹染色单体分离的相关基因在S、G₂/M期的表达规律,探讨这些基因在肿瘤细胞染色体数目畸变中的可能作用。 实验方法: 1.采用双胸苷同步化法将A549、SPC-A-1、MRC-5细胞同步化到S、G₂/M期,获取不同时相的细胞。 2.用实时荧光定量PCR精确检测不同时相细胞中粘合素、分离酶、保全素、细胞周期素B1基因的表达。 3.用原位杂交检测不同时相细胞中粘合素、分离酶、保全素、细胞周期素B1基因的表达。 实验结果: 观察了分离酶、保全素、粘合素和细胞周期素B₁基因在近二倍体和非整倍体细胞的细胞周期不同时相表达,结果显示:无论是近二倍体细胞还是非整倍体细胞,其分离酶、周期素B₁基因在G₂/M期表达高于S期;粘合素基因在G₂/M期表达低于S期;