研究背景非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)近年来的发病率在全球呈逐年上升趋势,且以每年300,000人的新增病例数增加。弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是NHL中最常见的类型,约占NHL的30-40%,是一组高度侵袭性及异质性的肿瘤,具有不同的形态学特征、免疫表型及遗传学改变。根据2008年WHO对淋巴瘤的分类及2016年WHO分类最新修订意见,将DLBCL分成如下4种亚型:弥漫性大B细胞淋巴瘤,非特指(Diffuse large B cell lymphoma,not otherwise specified,DLBCL,NOS);弥漫性大B细胞淋巴瘤,亚型;其他大B细胞淋巴瘤;高级别大B细胞淋巴瘤,伴MYC、BCL2和/或BCL6转位。DLBCL,NOS是最常见的亚型,2016年最新修订意见一定要根据其分子特征进一步细分:生发中心样(Germinal centre B-cell-like,GCB)型和活化B细胞样(Activated B-cell-like,ABC/non-GCB)型。临床治疗DLBCL常首先采用R-CHOP方案(利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松)+/-放疗,利妥昔单抗的应用使早期GCB型DLBCL患者达到80-90%的缓解率甚至无瘤生存。但文献报道,复发病例(10%-20%GCB型)及难治的ABC型病例(R-CHOP治疗失败)占到DLBCL,NOS病例总数的50-60%,大多数患者由于治疗失败而死于该肿瘤。因此,优化的一线治疗方案,以及更有效的救治策略仍然是目前一个重要的目标。诱导分化治疗是指在某些诱导分化剂的作用下,诱导肿瘤细胞向正常细胞方向分化,在形态、生物学行为、蛋白标记等方面均演变成正常或接近正常的细胞,又称为肿瘤细胞的再分化(redifferentiation)。诱导分化治疗将成为肿瘤治疗的新方向,是肿瘤四大靶向治疗新途径之一。本课题组在前期实验研究中发现,稳定过表达CD99基因的霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)细胞株 L428 细胞(L428-CD99)复现 B 细胞表型,打开向浆细胞分化的开关蛋白PRDM1,并诱导L428细胞向末端B细胞方向再分化。随后,将L428-CD99和L428-Con细胞进行蛋白质二维电泳(2-D DIGE),高通量的肽质量指纹图谱方法鉴定差异蛋白,发现Hematopoietic cell-specific Lyn substrate 1(HS1)是其中一个上调性表达的基因,并通过基于GO的蛋白质功能分析,采用GO fact开放软件对所得的蛋白进行在线聚类分析,惊喜发现HS1可能参与B细胞的分化,从而确定其为本课题的研究对象。HS1又称为HCLS1,CTTNL,lckBP1,p75,主要在正常骨髓,淋巴结,扁桃体,脾,胸腺,外周血细胞中表达。研究表明,HS1在粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)的刺激下,活化的 HS1 与 HAX1及LEF-1相互作用诱导粒细胞分化。HS1与Lyn相互作用是促红细胞生成素介导的红细胞分化的关键。HS1是一种抗原受体信号通路中酪氨酸激酶的底物,调节B淋巴细胞受体(BCR)介导的信号转导,参与调节B淋巴细胞增殖和抗原介导的凋亡过程。然而,HS1基因在各个不同分化阶段的B淋巴细胞亚群及浆细胞中表达如何?是否参与了B细胞向浆细胞分化的过程?尚未见报道,亟待开展深入研究。研究目的1.观测HS1在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞亚群和代表不同分化阶段的淋巴瘤细胞系及B细胞淋巴瘤组织中的表达及其规律;HS1表达在经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma,CHL)及富于T/组织细胞大B细胞淋巴瘤(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma,THRLBCL)的鉴别诊断意义。2.构建稳定沉默HS1的DLBCL细胞亚系。3.探究稳定沉默HS1诱导DLBCL细胞系向末端浆细胞方向分化的可能性和机制。4.揭示沉默HS1通过抑制NF-κB通路诱导ABC型弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞再分化的机制5.观测稳定沉默HS1的DLBCL细胞亚系的细胞形态及相关骨架蛋白的改变和对细胞凋亡的影响。研究方法1.观测HS1在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞亚群和代表不同分化阶段的淋巴瘤细胞系及B细胞淋巴瘤组织中的表达及其规律,HS1表达在CHL及THRLBCL的鉴别诊断意义。采用免疫组织化学方法检测慢性扁桃体炎患者的扁桃体及反应性增生的淋巴结HS1表达,观测在不同类型淋巴细胞间的表达差异。利用荧光流式细胞分选技术从慢性扁桃体炎患者扁桃体中分选出不同分化阶段B淋巴细胞亚群,分别是naive细胞、中心母细胞、中心细胞、记忆B细胞和浆细胞。运用Real-time quantitative PCR(RT-PCR)检测HS1在不同分化阶段B淋巴细胞亚群和淋巴瘤细胞株中的表达。应用Western Blot在蛋白水平检测正常B淋巴细胞及淋巴瘤细胞株HS1的表达水平。采用免疫组织化学方法检测各种类型B细胞淋巴瘤组织及CHL组织的HS1表达,揭示其临床意义。2.构建稳定下调HS1的DLBCL细胞亚系,观测其生物学特性含目的基因(HS1)干扰片段的慢病毒上清(实验组)及空载体(对照组)的慢病毒上清购自苏州吉玛公司。将含有重组慢病毒质粒的病毒上清(实验组和对照组)分别转染DLBCL,GCB型的细胞系(OCI-Ly1和OCI-Ly8),DLBCL,ABC型细胞系(OCI-Ly3和 OCI-Ly10),并命名为 OCI-Ly1-shHS1/NC、OCI-Ly8-shHS1/NC、OCI-Ly3-shHS1/NC和OCI-Ly10-shHS1/NC。实验组和对照组的慢病毒均带有嘌呤霉素抗性和GFP(Gluc-GFP)双标签。利用嘌呤霉素的抗性,对转染的细胞应用嘌呤霉素处理纯化,在荧光显微镜下观察转染及纯化效率,获得目的细胞。应用RT-PCR和Western Blot分别在mRNA及蛋白水平进行验证。流式细胞技术检测细胞周期及凋亡,CCK8检测细胞增殖。3.稳定沉默HS1诱导ABC型DLBCL细胞系向浆细胞再分化通过流式细胞技术观测浆细胞标记蛋白CD38、CD138,B细胞标记蛋白CD19在细胞亚系实验组和对照组中的表达情况。应用细胞沉积制成细胞蜡块切片HE染色观察细胞的形态改变。采用免疫细胞化学方法观测各细胞亚系实验组与对照组中浆细胞分化相关的免疫表型CD38、CD138、CD20、BCL6、Mum-1的蛋白表达水平。应用RT-PCR和Western Blot检测各细胞亚系实验组和对照组中与浆细胞分化相关转录因子PRDM1、Mum-1、BCL6和Pax5的mRNA水平和蛋白表达。4.揭示沉默HS1通过抑制NF-κB通路诱导ABC型弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞再分化的机制应用Western Blot检测OCI-Ly3和OCI-Ly 10细胞在沉默HS1前后及加入NF-κB信号通路抑制剂前后HS1、NF-κB信号通路蛋白及浆细胞分化相关转录因子PRDM1、Mum-1、BCL6和Pax5的蛋白表达。5.观测稳定沉默HS1的DLBCL细胞亚系的细胞形态及骨架蛋白F-actin和DBNL的排列改变,探究其对细胞凋亡的影响。正常B细胞中,HS1相互结合骨架蛋白DBNL的筛选;荧光显微镜观察沉默HS1前后对DLBCL细胞形态的影响;激光共聚焦显微镜观察实验组及对照组细胞骨架蛋白F-actin(罗丹明标记的鬼笔环肽染色)、DBNL(细胞免疫荧光)的排列改变;Western blot检测沉默HS1后对细胞骨架蛋白DBNL的影响。统计学处理采用统计软件SPSS17.0对实验结果进行统计学处理和分析。计量资料以均数±标准差(x±SD)表示,注:所有的实验均独立重复三次。RT-PCR结果用单因素方差分析(one way ANOVA),CCK8实验数据采用析因设计方差分析,每组别细胞同一天测得数据采用独立样本t检验(Independent-Samples TTest),凋亡检测结果采用独立样本t检验。统计结果判断,按P<0.05,差异具有统计学意义。研究结果1.HS1在人类正常不同分化阶段的B淋巴细胞亚群和代表不同分化阶段淋巴瘤细胞系及淋巴瘤组织中的表达规律,HS1表达在CHL及THRLBCL的鉴别诊断意义。(1)HS1在正常淋巴结及扁桃体组织中的表达免疫组化标记结果显示:HS1蛋白在两种淋巴组织的滤泡生发中心淋巴细胞表达最强,套区、边缘区和滤泡间淋巴细胞中阳性表达强度次之,位于滤泡之间的浆细胞的表达为阴性;此外,在扁桃体被覆的鳞状上皮中亦可见HS1强阳性表达。(2)依据免疫表型分选不同B淋巴细胞亚群根据相应的免疫表型分选不同B淋巴细胞亚群:B细胞(CD19+),naive B细胞(CD19+,IgD+,CD38-),中心母细胞(CD19+,IgD-,CD38+,CD77+),中心细胞(CD19+,IgD-,CD38+,CD77-),记忆B 细胞(CD19+,IgD-,CD38-)和浆细胞(CD19-,CD38+,CD138+)。(3)HS1在正常不同分化阶段B淋巴细胞亚群中的表达RT-PCR结果显示:HS1的mRNA表达在不同分化阶段B淋巴细胞亚群呈现阶段性变化,在naive B细胞中表达最高,中心母细胞、中心细胞和记忆B细胞表达水平中等,浆细胞表达则最低,几乎不表达。随着B细胞从幼稚分化到成熟,最终分化为浆细胞,HS1的表达呈现由高到低的趋势。(4)HS1在不同B淋巴瘤细胞系中的表达RT-PCR及Western blot结果显示:HS1的mRNA及蛋白表达在不同分化阶段B淋巴瘤细胞株中呈现阶段性表达。与对照组(正常B淋巴细胞)相比,B淋巴母细胞淋巴瘤(Nalm6)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(OCI-ly1,OCI-ly3,OCI-ly8和 OCI-ly10)、伯基特淋巴瘤(Raji,Daudi,Ramous 和 BJAB)、过表达 CD99的HL细胞(L428-99)均显示HS1高表达,浆细胞骨髓瘤(RPMI-8226)低表达,而浆细胞骨髓瘤(IM9)和霍奇金淋巴瘤(L428)不表达。(5)HSI在不同类型B淋巴瘤组织中的表达本研究通过免疫组化方法检测了 214例B细胞淋巴瘤HS1蛋白表达的情况。结果显示:DLBCL(53/53,100%),THRLBCL(12/12,100%)和滤泡性淋巴瘤(14/14,100%)所有病例均强阳性表达;套细胞淋巴瘤(13/13,100%)和淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤(14/14,100%)所有病例阳性强度从弱到中等;而B淋巴母细胞淋巴瘤(21/35,60%)、伯基特淋巴瘤(14/27,51.85%)和浆细胞骨髓瘤(9/28,32.14%)表达,瘤细胞阳性程度从弱阳性到强阳性病例均可见。其中浆细胞骨髓瘤阳性病例所占百分比最低;21例CHL中仅1例(4.76%,1/21)H/RS细胞弱阳性表达,余20例样本H/RS细胞均HS1阴性表达。(6)HS 1基因在B淋巴细胞及B细胞淋巴瘤中的表达规律综合上述实验结果:HS1蛋白表达主要定位于Pre-B细胞到成熟B细胞阶段,在浆细胞阶段表达下降甚至不表达,而来源生发中心残疾B淋巴细胞的HL肿瘤细胞(H/RS细胞),HS1蛋白几乎不表达。(7)HSI联合CD30、CD15和CD20应用于CHL和THRLBCL的诊断免疫组化结果显示,CHL的H/RS细胞:CD30(17/21,80.95%)、CD15(13/21,61.9%)、CD20(2/21,9.52%)和HS1(1/21,4.76%);THRLBCL:CD30(1/12,8.33%)、CD15(0/12,0%)、CD20(12/12,100%)和 HS1(12/12,100%)。CHL的CD30阴性(n=4)和CD20阳性(n=2)的病例HS1蛋白表达阴性,而THRLBCL的CD30阳性(n=1)病例的HS1蛋白表达阳性。据此,这两组肿瘤均明确了各自诊断。2.构建稳定沉默HS1的DLBCL细胞亚系,检测其生物学特性(1)沉默HS1表达慢病毒的设计及病毒颗粒合成实验组运用沉默HS1表达的慢病毒(HCLS1-Homo-1431、HCLS1-Homo-716、HCLS1-Homo-147、HCLS1-Homo-272)及对照组慢病毒(LV3-NC)均带有嘌呤霉素抗性和GFP(Gluc-GFP)双标签。病毒的设计和包装由苏州吉玛基因公司(GenePharma)完成。(2)稳定沉默HS1表达DLBCL细胞亚系的构建将沉默HS1 表达的慢病毒(HCLS1-Homo-1431、HCLS1-Homo-716、HCLS1-Homo-147、HCLS1-Homo-272)分别转染 DLBCL 细胞系 OCI-ly8 和OCI-ly10,转染成功后用嘌呤霉素纯化转染细胞,荧光显微镜下观察转染效率,用RT-PCR及Western blot检测转染后干扰效率。筛选稳定沉默HS1表达细胞亚系的标准:mRNA水平及蛋白表达均下降至50%以下,而对照组则无明显变化。实验筛选出带干扰HS1片段的慢病毒上清(HCLS1-Homo-1431)为目的片段,分别转染DLBCL细胞系OCI-ly1、OCI-ly3、OCI-ly8和OCI-ly10,同时在这4株细胞系中转染对照组慢病毒(LV3-NC)。(3)各细胞亚系的增殖和凋亡的检测实验组/对照组细胞:OCI-ly1-shHS1/NC、OCI-ly3-shHS1/NC、OCI-ly8-shHS 1/NC和OCI-ly 10-shHS1/NC。用CCK8试剂盒检测各实验组及对照组细胞的增殖情况,结果显示,与对照组相比,OCI-ly1-shHS1、OCI-ly8-shHS1、OCI-ly3-shHS1、OCI-ly10-shHS1增殖明确减慢。流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡,结果显示:较对照组相比OCI-ly1-shHS1(p=0.000,t=-30.174)、OCI-ly8-shHS1(p=0.009,t=-4.783)、OCI-ly3-shHS1(p=0.005,t=-5.582)和OCI-ly10-shHS1(p=0.026,t=-3.470),细胞均发生了 G1 期阻滞。OCI-ly3-shHS 1(p=0.025,t=-3.492)和 OCI-ly1O-shHS1(p=0.009,t=-4.763)凋亡增加,具有统计学意义,余各组均无明显变化。3.沉默HS1表达可诱导DLBCL-ABC型细胞系向浆细胞再分化(1)各细胞亚系浆细胞分化相关免疫表型的检测利用流式细胞仪检测CD19、CD38、CD138的表达,结果显示:1)ABC型细胞亚系OCI-ly3-shHS1、OCI-ly10-shHS1分别与对照组OCI-ly3-NC、OCI-ly1 0-NC相比,CD138的表达明显增强,其阳性检出率,shHS1组分别是72.76%及40.82%,而NC组分别为1.12%及0.52%。CD38及CD19的表达在shHS1组及NC组均无明显变化。2)GCB 型细胞亚系 OCI-ly1-shHS1、OCI-ly8-shHS1 分别与对照组 OCI-ly1-NC、OCI-ly8-NC相比,CD138、CD38及CD19的表达均无明显改变。(2)DLBCL细胞亚系HE图像和免疫细胞化学观测1)ABC型细胞亚系OCI-Ly3-shHS1与OCI-Ly3-NC的HE图像相比:OCI-Ly3-shHS1细胞的体积明显缩小,较多细胞出现较成熟浆细胞的形态,即细胞成椭圆形核偏位,细胞核旁出现浅染区,胞浆嗜碱性。免疫细胞化学结果:OCI-Ly3-shHS1的CD38、CD138和Mum-1蛋白的表达明显高于对照组OCI-Ly3-NC,而BCL-6和CD20的蛋白表达则无明显变化。2)ABC型细胞亚系OCI-Ly1O-shHS1与OCI-Ly1O-NC的HE图像相比:OCI-Ly10-shHS1细胞的体积明显缩小,部分细胞出现较成熟浆细胞的形态,即细胞成椭圆形核偏位,核旁出现浅染区,胞浆淡粉染色。免疫细胞化学结果:OCI-Ly10-shHS1的CD38、CD138和Mum-1蛋白的表达明显高于对照组OCI-Ly10-NC,而BCL-6的表达明显下调。而CD20的蛋白表达则无明显变化。3)GCB型细胞亚系OCI-Ly1-shHS1与OCI-Ly1-NC的HE图像相比:OCI-Ly1-shHS1细胞的体积明显缩小,少数细胞出现小淋巴细胞形态,即细胞形态规则,体积小,核深染,圆形,胞浆少。免疫细胞化学结果:OCI-Ly1-shHS1的CD38、CD138、Mum-1和BCL-6蛋白的表达与OCI-Ly1-NC相比无明显变化。而CD20蛋白的表达减少。4)GCB型细胞亚系OCI-Ly8-shHS1与OCI-Ly8-NC的HE图像相比:OCI-Ly8-shHSI细胞的形态无明显变化。免疫细胞化学结果:OCI-Ly8-shHS1的CD38和Mum-1的表达减少,CD138、BCL-6和CD20蛋白的表达与对照组NC相比无明显变化。(3)DLBCL细胞亚系的浆细胞分化相关转录因子的检测RT-PCR和Western blot检测各细胞亚系浆细胞分化相关转录因子BCL6、Mum-1、Pax5和PRDM1的mRNA及蛋白的表达。1)OCI-ly3-shHS1 与对照组(NC 细胞)的 RT-PCR 与 Western blot 检测结果显示:与对照组相比,在明显下调(>50%)HS1的mRNA和蛋白表达之后,转录因子的mRNA表达:Mum-1的表达上调(p=0.000),PRDM1表达下调(p=0.003),BCL-6 与 Pax5 的 mRNA 表达显著下调(p=0.000,p=0.000)。转录因子的蛋白表达:Mum-1的表达上调,PRDM1表达下调,Pax5的mRNA表达显著下调。2)OCI-ly10-shHS1与对照组(NC细胞)的RT-PCR与Western blot检测结果显示:与对照组相比,在明显下调(>50%)HS1的mRNA和蛋白表达之后,转录因子的 mRNA 表达:Mum-1 及 PRDM1 表达上调(p=0.002,p=0.000),BCL-6与Pax5的mRNA表达显著下调(p=0.034,p=0.005)。转录因子的蛋白表达:Mum-1和PRDM1的表达显著上调,BCL-6与Pax5表达显著下调。3)OCI-ly1-shHS1与对照组(NC细胞)的RT-PCR与Western blot检测结果显示:与对照组相比,在明显下调(>50%)HS1的mRNA和蛋白表达之后,转录因子的mRNA表达:Mum-1及PRDM1表达均下调(p=0.004,p=0.015),BCL-6,Pax5表达无明显变化。转录因子的蛋白表达:Mum-1、PRDM1和Pax5表达下调,未检出BCL-6的蛋白表达。4)OCI-ly8-shHS1与对照组(NC细胞)的RT-PCR与Western blot检测结果显示:与对照组相比,在明显下调(>50%)HS1的mRNA和蛋白表达之后,转录因子的mRNA表达:PRDM1蛋白表达明显下调(p=0.004),而Mum-1,BCL-6和Pax5的表达无明显改变,p值均大于>0.05。转录因子的蛋白表达:Mum-1和PRDMI的表达明显下调,BCL-6和Pax5表达则无明显改变。4.沉默HS1通过抑制NF-κB通路诱导ABC型弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞再分化的机制(1)OCI-ly3-shHS1 及 OCI-Ly10-shHS1 与相应对照组(NC 细胞)的 Westem blot 检测结果显示:OCI-Ly3-shHS1 及 OCI-Ly10-shHS1 细胞中,P105,cRel 蛋白表达水平下降,而P100蛋白水平上升,RelA,RelB蛋白水平未见明显变化。(2)NF-κB 信号通路阻断剂(BAY-11-7082)对 OCI-Ly3 及 OCI-Ly3-NC细胞的HS1蛋白表达的影响。Western blot检测结果显示:OCI-Ly3细胞分别在加入1μM、5μM及10μM的NF-κB信号通路阻断剂(BAY-11-7082)后,HS1蛋白表达水平下降OCI-Ly3-NC细胞在加入10μM的NF-κB信号通路阻断剂(BAY-11-7082)后,HS1蛋白表达水平下降(3)NF-κB信号通路阻断剂(BAY-11-7082)浓度为10μM对OCI-Ly3及OCI-Ly10细胞的NF-κB信号通路蛋白的改变。Western blot检测结果显示:与空白对照组相比,OCI-Ly3细胞中,p105、p100、RelB蛋白表达水平下降,cRel蛋白表达水平上升,RelA蛋白表达无明显改变。与空白对照组相比,OCI-Ly10细胞中,p105、RelA蛋白表达水平下降,cRel、RelB蛋白表达水平上升,p100蛋白未检出。(4)NF-κB信号通路阻断剂(BAY-11-7082)浓度为1 0μM及慢病毒稳定沉默HS1表达的OCI-Ly3及OCI-Ly10细胞的与浆细胞分化相关转录因子表达的改变。Western blot检测结果显示:与空白对照组相比,OCI-Ly3细胞中加入抑制剂BAY-11-7082及稳定沉默HS1后,HS1、PAX5和BCL6蛋白表达均下降,Mum-1蛋白表达均上升。PRDM1蛋白在加入抑制剂BAY-11-7082后表达上升,而稳定沉默HS1后,无明显变化。与空白对照组相比,OCI-Ly10细胞中加入抑制剂BAY-11-7082及稳定沉默HS1后,HS1、PAX5和BCL6蛋白表达水平下降,Mum-1蛋白表达水平上升;PRDM1蛋白在加入抑制剂BAY-11-7082后表达下降,而稳定沉默HS1后无明显改变5.稳定沉默HS1的DLBCL细胞亚系的细胞骨架蛋白F-actin和DBNL的排列观测及对细胞凋亡的影响。(1)HS1与DBNL免疫共沉淀用HS1单克隆抗体做“诱饵”蛋白,免疫共沉淀检查HS1与DBNL的相互结合作用。反过来,用DBNL单克隆抗体做“诱饵”蛋白,行免疫共沉淀检查DBNL与HS1的相互结合作用。结果显示:HS1与DBNL有相互结合作用。(2)鬼笔环肽标记细胞微丝骨架在激光共聚焦显微镜下观察:F-actin在OCI-Ly3-shHS 1和OCI-Ly10-shHS 1细胞中,分布在细胞浆内,尤其是细胞核周边丝束状的红色微丝骨架数量明显增多,组装结构复杂,局部微丝聚集成结节状,向细胞膜处迁移明显(3)免疫荧光标记骨架蛋白DBNL的改变在激光共聚焦显微镜下观察,OCI-Ly3-shHS 1和OCI-Ly10-shHS 1细胞的DBNL免疫荧光显示:细胞浆内及细胞核周边的红色丝网状荧光胞浆内数量明显增多,结构复杂,局部聚集成结节状,向细胞膜处迁移明显(4)Western blot检测骨架蛋白DBNL的表达Western blot结果显示:沉默HS1后,DBNL蛋白表达呈上调性表达,提示HS1可以负向调控DBNL表达。结论1.HS1蛋白表达主要定位于Pre-B细胞到成熟B细胞阶段的正常B细胞及对应阶段的肿瘤,在浆细胞及浆细胞骨髓瘤中表达下调甚至不表达,而来源于生发中心残疾B细胞的HL的肿瘤细胞(H/RS细胞)不表达HS1。2.联合CD30、CD15和CD20标记有助于CHL和THRLBCL的鉴别诊断。3.沉默HS1基因的表达可促进ABC型DLBCL细胞系向浆细胞分化。4.沉默HS1通过抑制NF-κB通路诱导ABC型弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞向浆样细胞再分化5.沉默HS1之后,细胞骨架排列改变,诱导瘤细胞的凋亡增加。创新之处1.首次揭示了HS1在人类不同分化阶段B淋巴细胞亚群中呈现阶段性表达的规律。2.首次提出沉默HS1表达能诱导ABC型DLBCL淋巴瘤细胞系向浆细胞方向分化,其机制是沉默HS1后,NF-κB信号通路活性受到抑制,ABC型DLBCL瘤细胞Mum-1、PRDM1表达上调,BCL6、PAX5表达下调,进而促进瘤细胞向浆细胞方向分化,为诱导分化治疗提供新的靶点和理论依据。