【摘 要】
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禽腺病毒宿主细胞广泛,繁殖后病毒滴度高,大多数呈隐性感染,是构建基因工程疫苗最为理想的载体之一。本实验室何秀苗等早期从健康鸡群中分离到一株无致病性的I型禽腺病毒,并
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禽腺病毒宿主细胞广泛,繁殖后病毒滴度高,大多数呈隐性感染,是构建基因工程疫苗最为理想的载体之一。本实验室何秀苗等早期从健康鸡群中分离到一株无致病性的I型禽腺病毒,并构建了禽腺病毒通用转移载体pFAVI-CMV。本研究在此基础上,用EcoRⅠ、NheⅠ双酶切通用转移载体pFAVI-CMV,通过电泳、回收载体DNA;同时,用同样的酶切pCDNA3.1-VP2,电泳、回收VP2片段。通过连接酶连接构建成插有VP2基因的转移载体,经酶切分析正确,命名为:pFAVI-VP2。以Lipofectin转染试剂将pFAVI-VP2 DNA与野生型禽I型腺病毒在鸡胚肾细胞(CEK)上进行同源重组,通过间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果获得一株表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的重组禽I型腺病毒,命名为:rFAVI-VP2。以梯度稀释和双层琼脂覆盖两种方法对重组病毒进行纯化,通过IFA方法进行检测,结果获得了纯化的rFAVI-VP2。用抗VP2特异性单克隆抗体建立的IFA方法对感染rFAVI-VP2病毒的细胞进行检测,证明该重组病毒能表达VP2蛋白抗原。用ELISA和PCR方法对在体外连续传递13代的重组病毒检测结果显示:该重组病毒能在体外稳定地传代。以上结果为禽I型腺病毒为载体的IBDV基因工程疫苗的开发打下了基础
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