乳酸杆菌作为人及动物肠道正常菌群的优势菌，有诸多的益生功能，选择它作为表达载体系统研制乳酸杆菌口服疫苗，可以实现乳酸菌的益生功能与外源基因特异性免疫的有效结合。已报道的乳酸杆菌的疫苗表达载体系统，大多是以抗生素抗性作为外源基因稳定表达的压力，存在耐药性基因扩散的问题。因此，以非抗生素抗性为标记和选择压力的系统的构建，已成为新的研究热点。以非抗生素抗性为选择压力的染色体-质粒致死平衡系统，是以细菌的管家基因缺陷菌株为受体菌，在质粒上插入同源或异源完整受体菌缺陷的基因，作为外源基因表达载体稳定的选择性压力。ThyA基因是细菌的一种管家基因，以其作为选择压力构建的非抗生素抗性表达载体在国内外的研究已较为成熟。本实验从健康仔猪肠道黏膜上分离到3株乳酸杆菌，种属鉴定后初步认为其分别为嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)(命名为L1)、德氏乳杆菌德氏亚种(L.delbrueckii subsp.delbruecki)(命名为L5)和唾液乳杆菌(L.salivarius)(命名为L13)。生长曲线测定结果表明，L1、L13的生长速度明显高于L5。耐酸、耐胆盐试验结果表明，酸对L1生长的影响并不大，pH值超过2.5，菌株的存活基本不受影响；pH值为1.5处理30min仍有一定的存活率。L13耐酸能力相对较差，只能耐受pH3.5和4.5。L1比L13更能耐受高浓度胆盐，在0.1％胆盐条件下，两株菌4h后布的存活率分别为70.00％和46.67％；但当胆盐浓度为0.2％时，4h后L1菌株的存活率为1.67％，而L13菌株的存活率极低，仅为0.0167％；胆盐浓度升至0.3％，4h后两株菌的存活率不超过0.01％。抑菌试验结果表明，两株乳酸菌对猪源大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。上述结果表明L1的性状优于L13，作为下一步试验的侯选菌株。对L1菌株进一步试验，在添加一定浓度的胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的MRS选择培养基上筛选得到TMP抗性、thyA基因突变型乳酸杆菌单菌落45个。将这45株TMP抗性，thyA基因缺陷的嗜酸乳杆菌在丰富培养基中反复传代，最终获得一株生长良好、生物学性状稳定的thyA基因突变型嗜酸乳杆菌，命名为L1-30。将其在MRS培养基和MRS选择培养基肉汤中传代，每5代取200μL培养物涂MRS选择培养基平板，计算每100个thyA基因突变菌落中，发生回复突变的比例。结果传100代，先后20次涂平板，在两种培养基上均未发现有L1-30的回复突变株。认为该菌在胸腺嘧啶或胸苷酸丰富和贫乏的环境下均能保持性状稳定。以L1-30作为受体菌，可以充分发挥乳酸菌的益生功能，thyA基因可以作为正向选择的遗传标记和选择压力，解决了抗生素抗性作为选择压力而造成的耐药性基因扩散问题。该菌株具有高效的安全性和遗传稳定性，为进一步构建以thyA基因为选择压力的质粒载体系统奠定基础。