羊膜对鳞状细胞肿物的抑制作用及其机制研究

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本文主要从以下几个部分展开论述:  第一部分 羊膜移植术联合局部干扰素对眼表鳞状新生物的临床效果观察  目的:评估眼表鳞状新生物(OSSN)患者行手术切除伴羊膜移植术(AMT)联合局部干扰素α2b(IFNα2b)治疗的临床结局.  方法:连续12例(12眼)患原发性眼表鳞状新生物并接受羊膜移植术联合局部干扰素治疗的患者入组.回顾并分析包括年龄、性别、肿物位置、最佳矫正视力(BCVA)、角膜上皮愈合速度、并发症、病理诊断和复发情况等临床数据.  结果:入组的12例患者(12眼)平均年龄66.2±10.1岁(51至79岁).术后随访时间23.2±9.8个月(6至40个月).12例病人均有角膜缘的侵犯受累,平均角膜缘圆周受累范围5.3±3.6钟点(1至12钟点).在随访期间,1例角膜缘12个钟点受累的患者在术后2周时出现新生血管化,在术后1个月时新生血管消退.术前中央角膜受累的2例患者术后视力提升,3例患者因白内障进展视力减退.全部病例均取得光滑的眼表及透明的角膜.最后一次随访时未发现炎症、新生血管、睑球粘连和复发的迹象.  结论:肿物切除伴羊膜移植术联合局部干扰素α2b(IFNα2b)治疗OSSN能够重建健康稳定的眼表,且无复发.这一发现为OSSN提供了有效的临床治疗手段.  第二部分 羊膜提取液对鳞状肿瘤细胞的抑制作用及其机制  目的:探索羊膜提取液对鳞状肿瘤细胞的抑制作用及其机制.  方法:液氮研磨羊膜后离心制作羊膜提取液,folin―酚试剂法(lowry法)测定羊膜提取液内蛋白浓度.使用不同浓度的羊膜提取液培养口腔鳞状细胞癌细胞系HN13细胞,浓度分别为0,0.3,0.6,0.9mg/ml.培养24小时后流式细胞仪测定各组细胞的细胞周期,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肿瘤细胞干细胞特性相关基因及其分裂、分化基因的相对表达量,包括MKi67、P63、P53、细胞周期蛋白D2(CCND2)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞角蛋白3(CK3);分别培养24、48、72小时后通过CCK8实验测定细胞活性.  结果:通过液氮研磨并用lowry法检测得到合适浓度的羊膜提取液.PCR检测显示培养24小时后MKi67、P63、P53、CCND2、CDK2、CK3在浓度为0.6mg/ml时相对于对照组的表达量有下降趋势,浓度为0.9mg/ml时相对0.6mg/ml组有上升的趋势,但除P63在0.6mg/ml浓度时表达量下降有统计学意义(P<0.05),其余各组间及相对于对照组均无统计学意义.CCK8实验检测发现在浓度为0.3mg/ml的羊膜提取液培养72h有增强HN13细胞细胞活性的作用(P<0.05);在浓度为0.6mg/ml时培养24h细胞活性被抑制(P<0.05),随着培养时间的延长其抑制作用逐步降低,至72h抑制作用相较于对照组无统计学意义;在浓度为0.9mg/ml时,随着培养时间的延长羊膜对HN13细胞活性的抑制作用逐渐增强,至72h其抑制作用最明显(P<0.001).  结论:羊膜提取液对肿瘤细胞的作用有促进也有抑制,与蛋白浓度及培养时间有密切关系.在24h内提取液浓度为0.6mg/ml时对肿瘤细胞活性的抑制作用最为明显,72h内提取液浓度为0.9mg/ml时抑制作用最强.24h内肿瘤细胞的相对基因表达量显示羊膜提取液通过降低肿瘤细胞的干细胞特性以抑制其活性,同时还可能通过抑制肿瘤细胞有丝分裂使细胞周期停滞而抑制细胞的增殖.
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