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抗生素做为饲料添加剂长期使用,尤其是滥用导致的毒性残留、耐药性等问题引起人们广泛的关注,世界各国的科学家努力寻求和开发无毒副作用的新型饲料添加剂。益生菌是最先被提出的新型饲料添加剂。与添加抗生素相比,使用效果相同,有时甚至更好而且无任何毒、副作用、不在体内残留、不引起耐药性,因而很快便成为人们关注的焦点。凝结芽孢杆菌和费氏丙酸杆菌是美国FDA和美国饲料控制官员协会批准使用的饲用微生物菌种。本论文以其为研究对象主要进行了以下几方面的研究。1.凝结芽孢杆菌的分离和鉴定从猪盲肠内容物中分离筛选出1株产芽孢乳酸菌,通过平板菌落形态、扫描电镜等形态学手段观察、生理生化实验鉴定以及16SrDNA序列分析,初步确定所得菌株为1株凝结芽孢杆菌。体外抑菌实验表明,该菌24h发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有明显的抑制作用,具有做为益生菌开发的潜力。2.凝结芽孢杆菌发酵工艺研究通过单因素实验确定凝结芽孢杆菌最佳培养条件为：种子液培养时间12h,发酵温度40℃,发酵起始pH7.0,接种量4%(v/v),装液量150ml/500ml三角瓶,发酵36h活菌数达到5.2×109cfu/ml。并进一步通过四因素四水平的正交实验确定最适培养基配方为玉米面1.5%,豆粕粉1%,硫酸铵0.6%,玉米浆0.6%, MgSO4·7H2O 1.0, K2HPO4 2.0, MnSO4 50mg/L, pH 7.0,发酵36h活菌数达到9.3×109cfu/ml。2.费氏丙酸杆菌高密度培养研究采用正交实验对费氏丙酸杆菌的发酵培养基进行了优化,然后利用补料分批法对费氏丙酸杆菌进行了高密度培养研究。研究发现费氏丙酸杆菌生长适宜的葡萄糖浓度为2%,碳源(葡萄糖)和有机氮源(玉米浆)是丙酸杆菌增殖的限制性底物,并在此基础上确定补料的碳氮比为10：4。通过葡萄糖反馈流加方式进行了补料培养,培养80h菌体密度OD600达到29.2,活菌数达到2.5×1012cfu/ml。4.凝结芽孢杆菌和费氏丙酸杆菌制剂研究分别采用真空干燥法和喷雾干燥法对凝结芽孢杆菌和费氏丙酸杆菌进行了制剂研究。凝结芽孢杆菌真空干燥的最佳温度是80℃,丙酸杆菌喷雾干燥的最佳温度是出口温度60℃。菌粉在室温条件下放置6个月后,样品中的活菌总数仍能维持在较高水平。