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目的:研究表明骨髓基质细胞HS-5可以保护白血病细胞,但是具体机制还不清楚,本研究利用si RNA干扰U937细胞中Hedgehog信号中的Gli基因,研究HS-5细胞对si RNA干扰的急性髓系白血病细胞(U937)凋亡的影响及Hedgehog信号在其中的作用。方法:通过Lipo2000技术将siRNA-Gli-1转染至U937细胞株,把提前铺好的HS-5细胞与转染si RNA-Gli-1的U937细胞进行共培养,进而模仿体内微环境对U937细胞凋亡的影响。姬姆萨染色观察si RNA-Gli-1转染细胞后形态学变化。Western blot技术及q RT-PCR检测Gli-1-si RNA转染后Gli-1蛋白及Gli-1m RNA表达水平。共培养24h?48h?72h,分离si RNA干扰U937细胞,采用细胞增殖率的CCK8试剂盒测各组U937细胞;Annexin V-PE和7-AAD双染流式细胞仪检测各组U937细胞凋亡率;PI单染流式细胞仪检测各组U937细胞周期时相分布;q RT-PCR方法检测各组U937细胞凋亡基因Bcl-2?Bcl-xl?Caspase3表达情况。结果:转染48小时后,在光镜下与HS-5细胞共培养的U937siRNA-Gli-1细胞的形态有点变小,透光度有点下降,可见少许颗粒;姬姆萨染色显示与HS-5细胞共培养的U937si RNA-Gli-1细胞可见皱缩,细胞碎裂;si RNA-Gli-1可下调U937细胞Gli-1蛋白及Gli-1m RNA表达水平;与HS-5细胞共培养的U937si RNA-Gli-1细胞增殖速度慢。与HS-5细胞共培养48h的U937si RNA-Gli-1细胞凋亡率高;与HS-5细胞共培养48h的U937si RNA-Gli-1细胞阻滞于G0/G1期;与HS-5细胞共培养48h的U937si RNA-Gli-1细胞Bcl-2及Bcl-xl的m RNA表达下调显著。与HS-5细胞共培养48h的U937si RNA-Gli-1细胞Caspase3的m RNA表达上调显著。结论:1.运用脂质体技术将si RNA-Gli-1转染至U937细胞,可以特异性下调U937细胞Gli-1m RNA及蛋白表达。2.与HS-5细胞共培养的U937si RNA-Gli-1细胞较共培养的U937未转染及U937si RNA-NC细胞凋亡率高,同时U937 si RNA-Gli-1细胞Bcl-2?Bcl-xl表达相对降低,Caspase3表达升高。3.干扰Gli-1基因可以逆转骨髓基质细胞HS-5对急性髓系白血病细胞U937的保护作用。部分原因是通过调节Bcl-2?Bcl-xl两个抗凋亡基因和Caspase3促凋亡基因实现的。