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缺血性心肌病是由缺血缺氧引起的一种最常见的心脏疾病,可引起心肌梗死,进而使心肌细胞活性减弱,逐渐被无活性的心肌病变组织替代,导致心肌重构和心力衰竭。目前,很多基于细胞和非细胞的生物学技术被研究用于治疗缺血性心肌病,但是这些技术均未在临床上得到实际的应用[1-3]。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年来发现的长度为18-25个核苷酸的内源性单链非编码RNA,广泛存在于各种生物中。Mi RNA-29s是miRNAs中的一类保守家族,包括miR-29a/b/c,研究发现,miR-29s在多种疾病的发病机制中发挥重要作用[4-7]。但miR-29b/c在心肌成纤维细胞血管新生和细胞增殖中的作用机制研究较少。血管内皮生长因子A(VEGFA)是血管新生和肿瘤增殖中的重要调节因子,它能够激活纤维母细胞转化为成肌纤维细胞,最终导致心室重塑和功能紊乱[8,9]。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是体内氧平衡的关键转录因子,在细胞增殖、生长代谢、血管新生、迁移和细胞凋亡等生理和病理过程中起重要作用[10-12]。本研究主要以人心肌成纤维细胞(Human Cardiac Fibroblast Cells,HCFs)和人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)为研究对象,研究mi R-29b/c在缺血性心肌病细胞增殖和血管新生中的作用及其调控机制,为缺血性心肌病的治疗提供一种全新的思路。目的:研究mi R-29b/c在缺血性心肌病细胞增殖和血管新生中的作用及其调控机制,为缺血性心肌病的治疗提供一种全新的思路。方法:(1)培养HCFs细胞,将miR-29b/c mimics实验组和非特异性miRNA对照组分别转染到细胞中,用RT-qPCR技术分析转染后miR-19b/c表达水平,并验证其转染效率。(2)CCK-8检测转染miR-29b/c mimics后对HCF增殖的影响,tube formation检测转染miR-29b/c mimics对HUVECs细胞血管新生作用的影响。(3)DIANA-TarBase v7.0预测miR-29b/c靶基因,并借助Western blot技术和RT-qPCR技术分别在蛋白水平和mRNA水平检测靶基因表达量(HIF-1α和VEGFA)。(4)基因芯片检测miR-29b/c在缺血性心肌病病人中的表达。结果:(1)RT-qPCR结果显示,与对照组相比,miR-29b/c mimics实验组表达量显著增加(***P<0.0001),且电镜结果表明,miR-29b/c实验组90%以上均带有荧光标记,说明miR-29b/c成功转染到细胞中。(2)CCK8实验检测发现,miR-29b/c mimics 转染组细胞活性在48h、72h 和 96h均减弱(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0001)。Tube formation 检测发现,转染 miR-29b/c mimics实验组对HUVECs细胞血管新生作用减弱。(3)DIANA-TarBase v7.0软件预测结果显示,miR-29b/c靶基因HIF-1α以及其下游相关靶基因VEGFA,Western Blot技术验证了 miR-29b/c主要通过抑制靶基因HIF-1α的表达,下调下游相关靶基因VEGFA的表达,从而抑制缺血性心肌病血管新生能力和细胞活化增殖过程。(4)基因芯片结果显示miR-29b/c在缺血性心肌病病人中表达下降。结论:miR-29b/c主要通过抑制靶基因HIF-1α的表达,下调下游相关靶基因VEGFA,进而抑制缺血性心肌病血管新生能力和细胞增殖过程。