论文部分内容阅读
目的:人上皮性卵巢癌是严重威胁女性健康的杀手之一,治疗方法比较单一,临床上主要采用手术减瘤联合术及以铂类为基础的化学药物治疗作为一线方案,尽管卵巢癌细胞化疗敏感性较强,但极易在经过多次化疗后,产生对化疗药物的耐药性,导致大多数患者在一线治疗好转后,再次出现肿瘤复发的情况。为了寻找新的突破口,本实验采用卵巢癌顺铂耐药细胞（SKOV3/DDP）作为实验模型,探索低剂量辐射是否可通过调控Bad、Bax逆转SKOV3/DDP的耐药性,为耐药性卵巢癌的治疗提供新的思路。方法:在细胞培养瓶内批量培养SKOV3/DDP（卵巢癌顺铂耐药细胞）,待细胞密度良好时,随机分为3个组:对照组、低剂量辐射组,常规剂量组。对照组不予照射;低剂量辐射组每间隔6h进行一次照射,每次照射剂量为0.5Gy,一共照射4次;常规剂量组仅照射一次,剂量为2Gy。采用CCK-8技术,检测顺铂对SKOV3/DDP的细胞增殖抑制率,计算各组顺铂的IC50值。采用流式细胞技术,检测各组SKOV3/DDP的细胞凋亡率。采用Western blotting蛋白印迹技术检测各组SKOV3/DDP细胞中Bad、P-Bad、Bax的相对蛋白表达水平。采用RT-PCR技术检测各组SKOV3/DDP细胞中Bad、Bax的相对mRNA表达水平。结果:CCK-8法检测发现,与对照组和常规剂量组相比,低剂量辐射组SKOV3/DDP细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,低剂量辐射组顺铂IC50明显低于其余两组（P<0.05）;流式细胞技术检测发现,与对照组和常规剂量组相比,低剂量辐射组SKOV3/DDP细胞凋亡率显著升高（P<0.05）;Western blotting技术检测发现,与对照组和常规剂量组相比,低剂量辐射组的P-Bad蛋白表达量明显降低（P<0.05）,Bax蛋白的表达量要明显升高（P<0.05）,但三组的Bad蛋白表达量无明显统计学差异（P>0.05）;RT-PCR技术检测发现,与对照组及常规剂量组相比,低剂量辐射组的Bax的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,而三组的Bad的mRNA相对表达量无明显差异（P>0.05）。结论及意义:在已知的卵巢癌耐药机制中,PI3K/AKT信号通路占据重要位置,其通路下游的Bad与Bax在调控肿瘤细胞凋亡中发挥重大的作用。本实验发现低剂量辐射具有增加SKOV3/DDP细胞对化疗药物（顺铂）敏感性的作用,而其这一作用可能是通过调控Bad和Bax来加强肿瘤细胞的凋亡而实现的,本课题可能为耐顺铂卵巢癌的治疗带来新的思路。