【摘 要】
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目的:以金荞麦为研究对象,体外细胞试验筛选其抗炎活性部位并进行化学成分分析和含量测定,通过建立LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,观察金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠肺组织病理形态改变、炎症因子变化、TLR4/NLRP3信号通路的影响,探讨金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠的保护作用及作用机制。方法:1通过建立LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型,检测各给药组细胞上清液中炎症因子的表达水平,筛选金荞麦抗炎
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目的:以金荞麦为研究对象,体外细胞试验筛选其抗炎活性部位并进行化学成分分析和含量测定,通过建立LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,观察金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠肺组织病理形态改变、炎症因子变化、TLR4/NLRP3信号通路的影响,探讨金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠的保护作用及作用机制。方法:1通过建立LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型,检测各给药组细胞上清液中炎症因子的表达水平,筛选金荞麦抗炎活性部位。2应用超高效液相色谱联用Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪快速识别鉴定金荞麦提取物中的化学成分,利用HPLC测定其主要活性成分含量。3采用滴鼻法构建LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、金荞麦提取物低、中、高剂量组和地塞米松阳性药组,通过观察小鼠肺组织病理形态、病理评分、肺组织湿/干重、肺泡灌洗液中炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）表达及WBC数量、肺组织MPO活性来评价金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠的保护作用。4通过qPCR法检测急性肺损伤小鼠肺组织中TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1βm RNA水平,初步探讨金荞麦提取物对急性肺损伤小鼠发挥保护作用的机制。结果:1与对照组比较,模型组细胞培养上清液中NO、IL-1β、IL-6表达水平显著升高（p＜0.01）,经金荞麦总提取物,石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水层提取部位（40μg/m L）干预后,除水层部位给药组外,其余各给药组炎症因子的表达均有不同程度的降低,而乙酸乙酯给药组效果最优。2金荞麦乙酸乙酯萃取部位主要含黄酮类和酚酸类成分,包括表儿茶素、金丝桃苷、原花青素B2、没食子酸、原儿茶酸等化合物,以及核苷类成分腺苷和生物碱类化合物小檗碱;其中,主要活性成分没食子酸、原花青素B2和表儿茶素含量分别为0.0563%、0.3707%、0.3868%。3与对照组比较,模型组小鼠肺组织病理学评分显著升高（p＜0.01）,肺组织湿/干重比值显著上升（p＜0.05）,肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6表达水平显著升高（p＜0.01）、白细胞数量显著增多（p＜0.01）,肺组织中MPO活性显著升高（p＜0.01）,经药物干预后,给药组小鼠各项指标均有不同程度的改善。4与对照组比较,模型组小鼠肺组织中TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1βm RNA水平显著升高（p＜0.01）,经药物干预后,给药组小鼠各项指标均有不同程度的改善。结论:1金荞麦乙酸乙酯萃取部位抗炎效果最佳,可能是多个活性成分共同作用的结果。2该研究建立的分析方法可快速识别鉴定金荞麦提取物中的化学成分,建立的含量测定方法稳定可靠,可准确测定金荞麦提取物中的活性成分含量,为研究其药理作用奠定了药效物质基础。3金荞麦乙酸乙酯部位可通过缓解LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎性病变,改善肺组织水肿程度,抑制肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α等炎症因子的表达水平及WBC等炎性细胞的数量,抑制肺组织中的MPO活性,而发挥预防和治疗作用。4金荞麦乙酸乙酯部位可能通过抑制TLR4/NLRP3信号通路的激活,减少炎症因子等对肺组织的损伤,抑制炎症反应的进一步扩大,发挥抗肺炎作用。
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