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目的:本研究采用阻塞大脑中动脉(Middle cerebral artery occlusions,MCAO)制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,研究栝楼桂枝汤(Gualou-Guizhi Decoction,GLGZD)对MCAO大鼠的治疗作用,并深入探讨GLGZD能否通过TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路调控小胶质细胞活化及表型转化从而发挥抗炎作用,以期进一步探究GLGZD缓解脑卒中后肢体痉挛的作用机制。方法:(1)MCAO大鼠模型的建立、分组及给药:使用线栓法模拟MCAO大鼠模型,并参照改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)对大鼠进行神经功能损伤程度的评价。将评分6~14分的大鼠分层随机分为MCAO模型组、GLGZD低、中、高剂量组以及尼莫地平(NMDP)组,另设假手术(Sham)组。各组大鼠均在手术当天评分并分组后开始给药,1次/d,连续7d。(2)GLGZD对MCAO大鼠的治疗作用:于药物干预第1、3、5、7d进行mNSS、Ashworth评分;Catwalk步态分析系统检测大鼠运动功能;MRI检测脑梗死体积;HE染色法观察脑组织病理变化;Nissl染色法观察神经细胞形态及数量;Tunel法检测神经细胞凋亡率。(3)GLGZD对小胶质细胞活化及表型转换的调控作用:qRT-PCR和免疫荧光法检测大鼠缺血侧大脑皮层Iba-1 mRNA和蛋白的表达,评估小胶质细胞活化水平;Western-Blot法和免疫荧光法检测CD16、CD206蛋白的表达,免疫组织化学法检测TNF-α、Arg-1蛋白的表达,分析小胶质细胞M1、M2型极化水平。(4)GLGZD对TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路相关因子表达的影响:qRT-PCR检测大鼠缺血侧大脑皮层TWEAK、Fn14、cIAP1、TRAF2、NIK、p100、CCL21、CXCR3 mRNA的表达;Western-Blot法检测TWEAK、Fn14、cIAP1、TRAF2、NIK、IKKα、p-IKKα、p100、CCL21、CXCR3总蛋白的表达;免疫荧光法定位定量分析Fn14、CCL21、CXCR3蛋白的表达;免疫组织化学法检测p52、Rel B核蛋白的表达。结果:1.GLGZD对MCAO大鼠的治疗作用:GLGZD能明显改善MCAO大鼠神经功能(P<0.05或0.01),明显降低大鼠患侧肌张力(P<0.05或0.01),改善大鼠运动功能(P<0.05或0.01)和缺血侧大脑皮层病理变化,显著增多MCAO大鼠缺血侧皮层Nissl阳性细胞(P<0.01),并可显著减少MCAO大鼠脑梗死体积和缺血侧皮层神经细胞的凋亡(P<0.05或0.01)。2.GLGZD对小胶质细胞活化及表型转换的调控作用:GLGZD能明显降低缺血侧皮层Iba-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或0.01),显著降低缺血侧皮层CD16、TNF-α蛋白表达水平以及M1型小胶质细胞极化率(P<0.01),并能显著提高缺血侧皮层CD206、Arg-1蛋白表达水平以及M2型小胶质细胞极化率(P<0.05或0.01)。3.GLGZD对TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路相关因子表达的影响:GLGZD能显著下调缺血侧皮层TWEAK、Fn14、NIK、p100、CCL21、CXCR3 mRNA的表达(P<0.05或0.01)和上调cIAP1、TRAF2 mRNA的表达(P<0.05或0.01);GLGZD能明显降低缺血侧皮层TWEAK、Fn14、NIK、CCL21、CXCR3总蛋白的表达(P<0.05或0.01)和提高cIAP1、TRAF2总蛋白的表达(P<0.05或0.01);GLGZD能在抑制p100总蛋白表达的同时抑制p100的加工,使各剂量组p100蛋白含量显著高于MCAO组(P<0.05或0.01);Fn14、CCL21主要表达于神经元细胞,CXCR3主要表达于小胶质细胞;GLGZD能显著降低p52、Rel B核蛋白的表达(P<0.01)。结论:GLGZD可促进脑缺血损伤后神经和运动功能恢复,缓解肢体痉挛,对脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,而这一作用可能与其通过影响TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路调控小胶质细胞活化及表型转化,抑制过度炎症反应有关。