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目的:研究草乌甲素(Bulleyaconitine A,BLA)对LX-2细胞增殖、凋亡的影响;分析BLA对乙醛诱导后LX-2细胞外基质分泌情况及其潜在的机制。方法:1.体外培养肝星状细胞系LX-2细胞,以不同的BLA浓度(0、1.17、2.34、4.69、9.38、18.75、37.50、75、150、300、600μg/mL)作用24 h和48 h后,CCK-8法检测各孔450 nm吸光度值。计算24 h及48 h半数抑制浓度(IC50)值。根据IC50值筛选BLA的实验浓度,将实验分BLA组(18.75μg/mL)与Ctrl组(10%FBS的DMEM完全培养液)。2.倒置显微镜观察各组细胞形态变化、DAPI染色倒置荧光显微镜观察各组细胞核变化。流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期情况。3.Western Blot检测各组Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。4.乙醛进一步激活LX-2细胞:分别用含不同浓度(0、10、20、50、100、200、400、600、800μmol/L)乙醛的培养液刺激LX-2细胞24 h。CCK-8实验检测不同浓度乙醛对LX-2细胞增殖影响。5.ELISA检测BLA对乙醛激活的LX-2细胞合成分泌Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的影响:实验分为3组:正常对照组、400μmol/L乙醛组及BLA组(BLA浓度为:18.75μg/mL,乙醛浓度为:400μmol/L),细胞培养24h后用ELISA法对三组细胞上清液中Col-I和Col-Ⅲ分泌量进行检测。6.Western Blot检测BLA对乙醛激活的LX-2细胞α-SMA、TGF-β1、MMP-1、TIMP-1蛋白表达的影响:采用Western Blot法对正常对照组、乙醛(400μmol/L)组及BLA组中α-SMA、TGF-β1、MMP-1、TIMP-1四种蛋白表达量进行检测分析。结果:CCK-8实验算得BLA对LX-2细胞24 h半数抑制率(IC50)为20.89μg/mL,48 h半数抑制率(IC50)为19.20μg/mL。流式细胞仪检测结果显示,相比对照组,草乌甲素组处于S期、G2/M的细胞减少(P<0.05),处于G1期的细胞增多(P<0.05)。Western Blot检测结果显示与Ctrl组相比BLA组Bax、Caspase-3的表达显著升高(P<0.05),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05)。用不同浓度乙醛进一步诱导激活LX-2细胞,发现乙醛浓度为400μmol/L时促进细胞增殖作用最明显。当用草乌甲素干预后,ELISA法检测细胞上清液Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量,乙醛组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量分别为:(22.91±1.34)、(32.27±2.06)ng/mL,正常对照组(NC组)Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量分别为:(10.18±0.76)、(21.83±1.51)ng/mL,乙醛组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量均显著高于NC组(P<0.05);BLA组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量分别为:(17.39±1.30)、(26.52±1.86)ng/mL,显著低于乙醛组(P<0.05),但显著高于NC组(P<0.05)。采用Western Blot法对NC组、乙醛(400μmol/L)组及BLA组α-SMA、TGF-β1、MMP-1、TIMP-1四种蛋白表达量进行检测结果显示,NC组α-SMA和TGF-β1蛋白表达量很低,经乙醛刺激的LX-2细胞α-SMA和TGF-β1蛋白表达量显著高于NC组,BLA组α-SMA及TGF-β1蛋白表达量显著低于乙醛组,但高于NC组;乙醛组的MMP-1表达量显著低于NC组,而TIMP-1表达量明显显著高于NC组(P<0.05);BLA组MMP-1表达量明显高于乙醛组,但低于NC组,TIMP-1蛋白表达量显著低于乙醛组,高于NC组(P<0.05)。结论:1.BLA能有效抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡。2.BLA能有效降低乙醛诱导的LX-2细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的合成与分泌,可能是通过升高MMP-1表达,降低TIMP-1表达,使MMP-1/TIMP-1比值增加实现的。3.BLA可能是通过抑制TGF-β1信号通路抑制LX-2细胞活化的。