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目的MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中具有调控功能的非编码RNA,目前对miRNAs在心肌损伤中的作用的研究很少。本课题主要探究了miR-762在心肌损伤中的作用。方法我们将小鼠原代心肌分为空白对照组和缺氧/复氧(A/R)处理的实验组,用高通量microRNAs基因芯片对收取的两组样品中的miRNA的表达谱进行差异性筛选。用qPCR对筛选出的miRNAs进行验证,并筛选出miR-762这个基因。采用缺氧/复氧(A/R)的处理对小鼠原代心肌细胞造成损伤后,使用qPCR检测miR-762在胞液和线粒体中的表达情况,并用荧光原位杂交技术和免疫共沉淀实验对其做出定位。设计与miR-762互补的化学修饰的antagomir以抑制内源miR-762和antagomir阴性对照(anta-NC)的表达,并经过A/R处理使心肌细胞受损,我们将其分为四组(对照,A/R,A/R+anta-NC,A/R+anta-762)。然后通过ATP含量、活性氧(ROS)水平、线粒体复合物活性和细胞凋亡等指标来检测心肌细胞受损时抑制miR-762的表达对心肌细胞和线粒体造成的影响。我们按照实验需要对小鼠进行了四组处理,antagomir以抑制内源miR-762和阴性对照(anta-NC)的表达,并采用心脏缺血再灌(ischemia/reperfusion,I/R)的方式建立小鼠心梗模型(Sham,I/R,I/R+anta-NC,I/R+anta-762)。然后收取正常的心脏组织和经I/R处理后的心脏组织,用qPCR检测miR-762在小鼠心梗后的表达情况,同时检测了线粒体复合物活性,细胞凋亡情况,心梗面积及心脏功能。结果(1)对miRNA基因芯片的结果进行分析并用qPCR验证后,我们发现与对照相比A/R处理后miR-762在线粒体中的表达明显升高。(2)miR-762主要定位于细胞质的线粒体中。(3)A/R处理会使原代心肌细胞受损并刺激miR-762的表达,而antagomir miR-762(anta-762)可以有效地抑制由心肌损伤引起的miR-762的表达。抑制miR-762的表达可以显著地抑制由A/R诱导的ATP的降低,抑制由A/R诱导的活性氧水平升高,抑制由A/R诱导的线粒体复合物活性的降低,并减少了心肌细胞的凋亡。(4)心脏缺血再灌(I/R)会使小鼠心脏受损甚至梗死,心梗区域的miR-762表达会升高。当抑制了miR-762的表达并对小鼠心脏进行I/R处理后,线粒体复合物I活性升高,细胞凋亡减少,心梗的面积减少,并且心脏功能恢复。结论我们通过A/R处理使小鼠原代心肌细胞受损,然后使用基因芯片筛选到了在受损的心肌细胞线粒体中高表达的miR-762这个分子。经过实验探究我们得出了以下的结论:(1)在受损的心肌细胞线粒体中miR-762的表达会显著升高。(2)抑制miR-762的表达可以显著地抑制由心梗导致的ATP的降低,活性氧水平升高,抑制心肌损伤造成的线粒体复合物活性的降低,并减少了心肌细胞的凋亡。(3)通过抑制miR-762的表达来恢复受损心脏中线粒体功能和心脏功能的新途径。这为治疗心梗等心脏疾病和线粒体相关疾病提供了一种新的治疗策略。