昆虫体内存在多种蛋白酶，主要发挥蛋白水解功能，如昆虫卵内蛋白酶在昆虫胚胎发育过程中降解卵黄蛋白质，供给胚胎发育必需的氨基酸，对胚胎发育具有重要的作用。另外蛋白酶对昆虫的发育变态具有十分重要的作用，因此倍受瞩目。昆虫体内的组织蛋白酶已有很多报道，从20世纪60年代至今，已对家蚕、果蝇、棉铃虫、蝗虫和蚊子等数种昆虫的蛋白酶进行了研究，所报道的蛋白酶大多属于半胱氨酸、丝氨酸和天冬氨酸蛋白酶类。家蚕是重要的经济昆虫和模式生物，2003年，中国家蚕基因组框架图的闻世给我们提供了大量重要信息，虽然已有部分家蚕蛋白酶作了报道，但是家蚕中蛋白酶具体的种类，除了报道的蛋白酶另外否还有新的蛋白酶，蛋白酶在家蚕中的组织分布和发育时期的表达情况，以及蛋白酶在家蚕中的具体生理功能是怎样的，这些问题引导着我们继续对家蚕蛋白酶进行研究。 本论文在家蚕基因组框架图的基础上，采用生物信息学分析方法，利用家蚕基因组数据库和EST数据库，广泛调查了存在于家蚕中的组织蛋白酶的种类以及在家蚕中的组织分布和不同发育阶段的表达情况，另外对新的组织蛋白酶D基因进行了克隆和生物学信息分析；并运用RNAi实验方法初步探索组织蛋白酶B在家蚕中的功能。本论文的研究工作主要分为以下几部分： 1．根据基因组数据预测：家蚕包括13个蛋白酶基因(编号：Bmb028908、Bmb029117、Bmb011691、Bmb024796，Bmb011691、Bmb024796、Bmb028908，Bmb013888，Bmb008297，Bmb029952、Bmb015815，Bmb020327，Bmb032550)，分为组织蛋白酶B、D、L、O、、S、F、K等7种类型，经EST证据和实验结果得知，主要的家蚕组织蛋白酶类型是组织蛋白酶B、组织蛋白酶D和组织蛋白酶L；组织蛋白酶L(Bmb021457)已有序列报道，组织蛋白酶B(Bmb011691)文章已经报道。 2．家蚕组织蛋白酶基因的时期表达：组织蛋白酶B，组织蛋白酶D和和组织蛋白酶L的绝大多数基因在时期表达中都检测到mRNA，时期主要包括：未受精卵，产卵24h，三龄，五龄3天，五龄7天，上簇，化蛹。所有时期都有表达的包括：组织蛋白酶B Bmb028908、Bmb011691、Bmb024796，组织蛋白酶L Bmb021457、Bmb023791和组织蛋白酶D Bmb008297，另外，在未受精卵、产卵后48h胚胎和戊期胚胎内检测到大小分别为1.0kb和1.1kb两种类型的组织蛋白酶DmRNA，推测发生了选择性拼接；个别时期有表达的有：组织蛋白酶L Bmb032720在卵期未检测到mRNA，组织蛋白酶S Bmb013888只在上簇和蛹期检测到mRNA。 3．家蚕组织蛋白酶基因的组织分布：组织蛋白酶B，组织蛋白酶D和组织蛋白酶L有不同程度的表达差异。组织主要包括：五龄第3天的血，中肠，丝腺，脂肪体，精巢，卵巢。在所有组织中都有表达的有：组织蛋白酶B Bmb011691，组织蛋白酶L Bmb023791，组织蛋白酶DBmb008297；个别组织中有表达的：组织蛋白酶B Bmb024796和Bmb028908只在精巢中表达；组织蛋白酶L Bmb032720在血液和脂肪体中没有表达，Bmb021457在血液中没检测到mRNA；组织蛋白酶S Bmb013888在脂肪体，精巢，卵巢中有表达。 所有时期和组织中都没有检测到表达的基因有：组织蛋白酶K Bmb020327、组织蛋白酶FBmb032550、组织蛋白酶O Bmb015815、Bmb029952和组织蛋白酶L Bmb029117。