【摘 要】
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本工作制备了温度敏感性载体聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物(PNIPArg),考察了PNIPArg和质粒DNA的相互作用,研究了不同温度下PNIPArg对小鼠成肌细胞(C2C12)的体外基因转染。
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本工作制备了温度敏感性载体聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物(PNIPArg),考察了PNIPArg和质粒DNA的相互作用,研究了不同温度下PNIPArg对小鼠成肌细胞(C2C12)的体外基因转染。具体工作主要包括以下方面:1.制备聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物,并采用红外光谱和核磁共振光谱(13C NMR)方法确定产物的形成,浊度方法得到PNIPArg水溶液的低临界转变温度LCST为35.2℃。2.考察PNIPArg和质粒DNA形成的复合物的物化性质,研究温度响应性对于复合物的形成、复合物的大小以及稳定性的影响。透射电镜的结果表明复合物呈均一的小球状,其粒径分布在50-100nm左右。圆二色谱实验表明,PNIPArg载体对DNA构象的影响不大,温度高于LCST可以使复合物结合地更紧密。琼脂糖凝胶电泳及其酶解实验都表明升高复合物形成的温度可以促进复合物的形成,提高复合物的稳定性。3.以C2C12细胞为宿主细胞,考察聚精氨酸载体和温度敏感PNIPArg载体对于介导含有荧光素酶(luciferase)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因系统的质粒PGL3和pEGFP-C1的体外转染。结果证实PNIPArg载体可以成功将质粒DNA导入C2C12细胞,并促使其报告基因的表达。选择不同温度的培养路线可以成功地实现了对转染过程和基因表达过程的温度控制。
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