论文部分内容阅读
本研究用50mg/L和500mg/L的多菌灵(MBC),将取自安徽、江苏、湖北三省的192个油菜菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌株分为对多菌灵敏感(MBC-S)、抗性(MBC-R)和高抗(MBC-HR)的三种类型。78个菌株在500mg/L上能够生长,它们被认为是MBC-HR菌株;1个菌株在50mg/L上生长良好,但在500mg/L上不能生长,被认为是MBC-R菌株;剩下的113个在50mg/L上不能生长,被看做MBC-S菌株。从这些菌株中挑选了25个菌株测定它们对MBC、乙霉威(NPC)、扑海因、三唑酮和白克列五种药的交互抗性。结果表明,MBC-HR菌株对MBC和NPC表现存在负交互抗性,MBC-R菌株对MBC和NPC都表现抗性,所有测定的菌株对其它三个药表现敏感。对不同来源地的65个菌株遗传多样性进行分析发现,抗性菌株具有不同的遗传背景,表明不同地区的抗性菌株来源于不同的亲本。对油菜菌核病菌的β-微管蛋白基因序列分析表明,MBC-HR菌株中β-微管蛋白198位氨基酸由野生的Glu(GAG)突变为Ala(GCG),MBC-R菌株的200位氨基酸由野生的Phe(TTC)突变为Tyr(TAC),除了这些位点外,其它氨基酸没有变化。根据MBC-HR和MBC-R菌株中β-微管蛋白基因第198位和200位的密码子的点突变,分别设计了两对等位基因专化PCR引物RF-198+SR12和RF-200+SR12。结果表明,RF-198+SR12引物能从MBC-HR菌株中特异地扩增出一条403-bp的条带,RF-200+SR12引物能从MBC-R菌株中扩增出400-bp的条带,利用RF-198、RF-200和SR12引物的多重PCR能同时从无论是MBC-HR或MBC-R菌株中扩增出400-bp或403-bp的条带,而从敏感的菌株或其它真菌中不能扩增出任何条带。