杂交鲟体表溃疡病的病原学及组织病理学研究

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经常规细菌分离,从自然发生体表溃疡病的杂交鲟中分离到一株病原菌K070401。该菌株在TSA平板上生长呈1.5-2mm大小,边缘光滑,中央凸起,半透明的菌落。显微镜下见革兰氏阴性短杆菌,两头钝圆,大多数细菌单独存在,少数细菌成对甚至成链存在。该菌葡萄糖氧化发酵阳性,氧化酶检测阳性,0%NaCI生长,脂酶阳性。能利用甘露醇具运动性,能发酵麦芽糖,不产生H2S,葡萄糖产酸阳性,葡萄糖产气阳性,精氨酸双水解酶阳性,DNA酶阳性,鸟氨酸脱羧阴性,还原硝酸盐。对罗美沙星,磺胺异嗯唑,氯霉素,阿奇霉素敏感,对克拉霉素,强力霉素,链霉素,美满霉素较敏感,对氨苄青霉素,万古霉素,阿莫西林不敏感。应用细菌通用PCR引物,扩增出K070401菌株的16SrDNA的互补DNA片段,该片段大小为1473bp。将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer。结果表明,该菌属于气单胞菌属的细菌,再将获得的序列与GenBank中已报道的的嗜水气单胞菌16SrDNA序列用DNAstar软件进行多序列比对分析和构建系统发育树。结果证实,K070401分离株与其他嗜水气单胞菌形成一个簇群,同源性高达为99.2%以上,故确定该菌为嗜水气单胞菌。同时,通过肌肉注射、划痕浸泡和浸泡试验检测该菌对杂交鲟的毒力,结果表明,前两种方式出现与自然发病鱼相似的体表溃疡症状,并引起死亡,病灶处骨骼肌间质水肿,间隙增宽,间质中有大量红细胞及嗜中性白细胞、淋巴细胞、和单核细胞等炎性细胞浸润;肌纤维变性,肌浆凝固,嗜酸性增强,呈严重红染。有的肌纤维出现坏死,肌浆溶解,严重的溶解成空泡状,仅残存少量的肌膜,部分区域肌纤维断裂。肾小管上皮细胞肿胀,严重颗粒变性,有的肾小管上皮细胞可见轻微的空泡变性;严重的可以见到肾小管上皮细胞的坏死,细胞核淡染,消失。可见肝脏细胞肿胀,体积增大,肝细胞胞浆内出现多量大小不等的空泡,呈严重空泡变性,大量肝细胞坏死,细胞核溶解消失。
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