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研究背景再灌注治疗是冠心病急性心肌梗死(AMI)治疗史上里程碑式的进展,其手段主要有三种：静脉溶栓、经皮冠状动脉腔内成形及支架植入术(PTCA+PCI).冠脉旁路移植术(CABG),随着介入器械和技术的日臻成熟,PCI已成为治疗冠心病AMI的主要手段。但是,再灌注治疗只是一种局部治疗手段,并不能终止冠心病的病理发展进程,加之治疗后出现的一系列心肌缺血再灌注损伤(MIRI),严重制约了冠心病的治疗效果。在MIRI过程中炎症反应、氧化损伤、钙超载及能量利用障碍等都发挥着重要作用,其中钙超载是造成心肌细胞损伤和死亡的共同通路,故防治钙超载是减轻MIRI的重要举措。目前针对MIRI的西医干预多限于实验研究,很多药物尚未应用于临床,只有苯磺酸氨氯地平防治其他器官(如肝脏、卵巢)再灌注治疗后钙超载的实验报道。但由于苯磺酸氨氯地平是通过作用于血管平滑肌的L型Ca通道从而抑制钙超载,存在作用靶点单一、可明显抑制心肌细胞收缩功能,副作用较大,故临床应用有一定局限性。中药也有钙拮抗作用,但其具体作用特点及机制与临床常用有效西药钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平(络活喜)的异同未见报道。基于心肌缺血再灌注损伤的中医病因病机,结合多年临床经验导师创制出益气活血复方(以下简称复方),功在益气活血,凉血安神,其主要组成为黄芪、丹参、三七、银杏、酸枣仁等提取物。围绕“防治钙超载”和“保护心功能抑制心室重构”这两大目标,进行益气活血复方对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用及机制的研究,拟为益气活血复方防治MIRI特色和优势分析提供实验依据。目的观察益气活血复方对心肌缺血再灌注损伤大鼠心室早期重构、心脏射血分数、和心肌梗死区／缺血区比例的影响；并从1miRNA-133调控钙超载及细胞凋亡角度探讨益气活血复方的作用机制。方法225只雄性Wistar大鼠,体重为300±20g,随机分为假手术组、模型组、络活喜组、益气活血复方高、中、低剂量6组,预防性给药7天后,结扎大鼠心脏冠脉左前降支,50min后复灌,制作大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别于造模前、造模后及复灌48h行心脏射血分数及心室内径检测,后处死大鼠,取血,离心取血清,剪取心脏,以依文思蓝-TIC双染色评估心肌梗死区与缺血区面积百分比,据此选择益气活血复方最优剂量进行后续机制探讨。每组取6只大鼠,行HE染色及TUNEL染色,取缺血区心肌组织,比色法检测心肌钙离子含量,Western blot法检测左心室缺血区心肌组织SERCA、CasR、MAPK通路、CytC、Caspase-3及Bcl-2蛋白的表达,Real-Time PCR法检测大鼠左心室缺血区心肌组织miRNA-133的表达。结果(1)心脏EF值：①造模术后：与假手术组相比,其余5组EF值均有不同程度的降低,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组间无差异。②复灌48h：模型组较造模术后EF值明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),余各组均有不同程度升高,但较造模术后无差异。③复灌48h：与假手术组相比,各组心脏EF值均有显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,益气活血复方高、中、低剂量组均能显著提高EF值,差异具有显著统计学意义(P<0.05),但三者之间无差异；络活喜组与模型组无明显差异。(2) LVIDd及LVIDs: ①LVIDd:与假手术组相比,模型与低剂量组LVIDd明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组与假手术无明显差异。与模型组相比,高剂量组LVIDd显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)；余络活喜、中剂量及低剂量与模型组无差异。②LVIDs:与假手术组相比,模型组LVIDs显著增大,差异具有统计学意义(P<0.01);余各组间无明显差异。与模型组相比,高剂量及中剂量组LVIDs显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但二者之间无差异。(3)心肌梗死／缺血区比率(梗死区／缺血区比率大于30%小于60%)：与模型组相比,络活喜及高剂量组均能显著减小心肌梗死／缺血区比率,差异具有统计学意义(P<0.05)；但络活喜及高剂量两组间无明显差异。(4)心肌组织钙含量：与假手术组相比,模型组钙离子显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；络活喜及高剂量组含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但络活喜及高剂量二者组间无明显差异。(5)对SERCA2A及CasR表达的影响：①SERCA2A与假手术相比,模型组心肌SERCA2A表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)：与模型组相比,络活喜和高剂量组表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),但络活喜和高剂量组间无明显差异。②CasR:与假手术组相比,模型、络活喜及高剂量组CasR表达水平显著升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,高剂量组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);高剂量与络活喜组相比,心肌CasR表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。(6)心肌细胞凋亡检测：与假手术相比,各组心肌凋亡指数均有显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜及高剂量均能显著降低心肌凋亡指数,差异具有统计学意义(P<0.01),但二者组间无明显差异。(7)对CytC、Caspase-3及Bcl-2表达的影响：①CytC:与假手术相比,模型及高剂量组心肌CytC表达均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；络活喜与假手术之间无明显差异：与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但络活喜与高剂量组间无明显差异。②CasPase-3:与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组CasPase-3表达均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但络活喜与高剂量组间无明显差异。③Bcl-2：与假手术相比,模型和络活喜组均有明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),高剂量与假手术组间无差异；与模型组相比,络活喜和高剂量组均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)：与络活喜组相比,高剂量组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。(8)对P38、JNK、ERK1/2表达的影响：①P38：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组P38表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,络活喜和高剂量组显明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);络活喜与高剂量组间无明显差异。②.JNK：与假手术组相比,模型组表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；余各组间无明显差异。③ERK1/2：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组ERK1/2表达水平均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比,络活喜组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)；与络活喜组相比,高剂量组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(9)对miRNA-133表达的影响：与模型组相比,假手术、络活喜及高剂量组miRNA-133表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)；与假手术相比,络活喜及高剂量组无明显差异;络活喜与高剂量组之间无明显差异。结论(1)益气活血复方和络活喜均可减小大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌梗死面积；此外益气活血复方还能提高再灌注引起的心脏EF值降低、抑制LVIDd、LVIDs的增大,从而抑制MIRI早期左心室的恶性重构,改善心功能,其综合效应明显优于络活喜。(2)益气活血复方能抑制心肌缺血再灌注损伤钙超载,并减轻钙超载引起的线粒体途径的心肌细胞凋亡。(3)益气活血复方可能通过上调miRNA-133水平、调节p38MAPK通路来发挥保护受损心肌的作用。