【摘 要】
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油橄榄（Olea europaea L.）为木犀科（Oleaceae）常绿乔木,是世界四大木本油料植物之一。中国从1964年开始引种油橄榄,现已发展到12个省（市、自治区）37个地级市67个县（市）,总面积8万hm~2。随着我国油橄榄产业的发展,油橄榄叶大量产生,每年仅修剪产生的叶子多达60万吨被丢弃或焚烧,这不仅导致资源浪费,引发环境污染、生态恶化等一系列问题,同时也增加油橄榄种植农户的废弃物处
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油橄榄（Olea europaea L.）为木犀科（Oleaceae）常绿乔木,是世界四大木本油料植物之一。中国从1964年开始引种油橄榄,现已发展到12个省（市、自治区）37个地级市67个县（市）,总面积8万hm~2。随着我国油橄榄产业的发展,油橄榄叶大量产生,每年仅修剪产生的叶子多达60万吨被丢弃或焚烧,这不仅导致资源浪费,引发环境污染、生态恶化等一系列问题,同时也增加油橄榄种植农户的废弃物处理成本。因此,本研究以油橄榄叶为试验材料,采用BBD（Box-Behnken design）优化水热浸提（HWD）和超声辅助提取（UAE）油橄榄叶中总酚（TP）、总黄酮（TF）、橄榄苦苷（OE）,获得最佳的提取工艺,并利用高效液相色谱（HPLC）法定性和定量分析不同品种油橄榄叶中酚类成分和营养成分的季节变化趋势,最后评估油橄榄叶酚类提取物（PE）和OE的抗氧化能力及抗癌活性,以期为油橄榄叶在医药、化妆品、功能食品等方面的应用提供理论依据和技术支撑。主要研究结果如下:1.BBD优化HWD和UAE提取油橄榄叶总酚,HWD最佳工艺:提取温度75℃、乙醇浓度50%、料液比1:40 g/m L、提取时间40 min,TP得率18.98%。UAE最佳工艺:料液比1:20 g/m L,超声功率240 W,提取时间20 min,乙醇浓度58%,TP得率31.08%。2.BBD优化HWD和UAE油橄榄叶总黄酮,HWD最佳工艺:甲醇浓度82%、料液比1:29 g/m L、提取温度90℃、提取时间106 min,TF得率3.07%。UAE最佳工艺:提取温度50℃,超声功率270 W,提取时间50 min,料液比1:41 g/m L,TF得率7.50%。3.BBD优化UAE提取橄榄苦苷的最优工艺:超声功率240 W,料液比1:20 g/m L,甲醇浓度78%,OE得率为7.45%。4.不同品种油橄榄叶中TPC、TFC、OE和6种黄酮类成分在不同季节含量差异显著。其中,TPC、TFC和OE全年的变化范围分别为:325.81-124.30 mg GAE/g、275.32-42.20 mg RE/g和151.74-34.45 mg/g DW,且总体上表现为春、冬两季增加,夏、秋两季下降。6种主要黄酮类成分在不同的季节有不同的变化趋势,从总体上看,木犀草苷和芹菜苷含量最高,槲皮素和芦丁次之,芹菜素和木犀草素最少。在22个主栽品种中,KLMD（卡拉马达）、ZL（张林）和ABSL（阿布桑娜）的TPC、TFC和OE含量更稳定,但QMLE（切姆拉尔）、ZL（张林）、XPG（小苹果）、GDE（戈达尔）和BLT（贝拉特）叶片中黄酮类成分更丰富。5.不同品种油橄榄叶中FAAC（游离氨基酸）、SSC（可溶性糖）和SPC（可溶性蛋白）表现出不规律的季节变化,全年的波动范围分别为18.30-2.49、18.25-6.31和6.47-0.87 mg/g DW。FAAC和SPC在春季升高,SSC在5-7月含量较高。在22个主栽品种中,FO（佛奥）、BLT（贝拉特）和JF（九峰）的FAAC、SSC和SPC比其它品种更高。6.体外抗氧化能力试验表明,在20-120 mg/m L质量浓度范围内,PE清除DPPH和超氧自由基活性以及总还原力与质量浓度呈量效依赖关系。PE清除DPPH自由基的IC50（0.14 mg/m L）比OE更低（0.27 mg/m L）,但清除超氧自由基的IC50（0.93 mg/m L）比OE更高（0.29 mg/m L）,其总还原力与OE相近。7.在40-200μg/m L质量浓度范围内,PE浓度越高抑制He La和S180细胞增殖能力越强。在24 h和48 h时,PE抑制He La细胞的IC50值分别为0.83和0.53μg/m L,抑制S180细胞的IC50值分别为2.19和0.97μg/m L。PE浓度从160μg/m L增至200μg/m L时,He La细胞的MMP（线粒体膜电位）水平下降更低,染色体断裂更严重;S180细胞的MMP和细胞形态结构也显著改变,但对浓度变化不敏感。PE通过升高caspase-3和caspase-9活性的信号途径,诱导He La和S180细胞凋亡。OE抑制He La和S180细胞增殖的能力比PE更强,诱导两种细胞凋亡的途径与PE相似。
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