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中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus; MERS-CoV）是一种能引起呼吸性疾病的致死率高的新型人冠状病毒;能感染人、蝙蝠、单峰骆驼、羊驼等。自2012年9月至2018年4月底; WHO共报道了2206例实验室确诊病例;其中787例死亡（死亡率约为35.7%）。在2015年;我国广东省确诊了首例输入性中东呼吸综合征病例;这对我国 MERS 疫情的防控敲响了警钟。由于目前尚无获批的有效疫苗和治疗药物;及时诊断和隔离是控制该病暴发流行的有效方法。 MERS-CoV现有的检测方法多以核酸检测为主;WHO发布的MERS-CoV的实验室确诊程序临时指导文件中推荐使用 real-time RT-PCR 方法对MERS-CoV进行检测确诊。针对MERS-CoV抗原检测方面;双抗体夹心ELISA、胶体金免疫层析试纸等方法已被建立。但这些方法普遍存在需昂贵的实验设备、流程繁琐费时、易出现假阴性和假阳性的问题。为克服以上检测方法的不足;本研究旨在建立针对MERS-CoV核酸和抗原的简便、快速、特异的新型检测方法。 1、MERS-CoV反转录环介导等温扩增核酸可视化（RT-LAMP-VF）检测方法的建立与评价;针对MERS-CoV N基因的保守区设计6条特异性引物;用于环介导等温扩增;扩增产物通过一次性核酸可视化装置直接肉眼观察。RNA 转录本及MERS-CoV RNA对RT-LAMP-VF方法进行敏感性评价;RNA转录本、SARS-related coronavirus ( SARSr-CoV);HKU4;HKU1;OC43;229E等对其进行特异性评价。结果显示：扩增体系中内引物终浓度为0.4 μM时;合成的RNA转录本在61℃恒温扩增30min效率最高。RT-LAMP-VF方法可在35min内特异性检测到2×101copies/μL的RNA转录本及1×101copies/μL MERS-CoV RNA;且与其他冠状病毒等无交叉反应。 2、中东呼吸综合征冠状病毒量子点免疫层析试纸的制备;采用传统的EDC 偶联法将羧基化 CdTe /ZnSe 量子点与抗 MERS-CoV RBD 的单克隆抗体（mAb/MERS-CoV）共价偶联;通过斑点免疫印迹检验偶联物的活性;以做捕获抗体备用;以马抗MERS-CoV IgG作为检测抗体;在双抗体夹心法原理基础上采用免疫层析技术制备MERS-CoV量子点免疫层析试纸。MERS-CoV假病毒对制备的量子点免疫层析试纸进行敏感性评价;MERS-CoV 假病毒、商品化SARS-CoV S1 亚蛋白、猪流行性腹泻病毒、H5N1 流感病毒病毒样颗粒对其进行了特异性评价。结果显示：5μL QDs在pH=6.4的体系中被46.8μg EDC活化后;能与16μg mAb/MERS-CoV高效率偶联;且偶联物具有良好的生物活性。制备的 MERS-CoV 量子点免疫层析试纸可在 15min 内检测到 2×53TCID50/mL MERS-CoV假病毒;且具有较好的特异性。