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目的:建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠模型,通过观察健脾补肾方对EAMG小鼠的体重、临床症状、乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)、白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的影响,探讨研究健脾补肾方治疗重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的作用机制。方法:健康清洁级雌性C57BL/6小鼠,周龄(8-10周),体重约16-20克,共计60只,参考随机数字表法将实验小鼠随机分为空白对照组10只和实验模型组50只。将鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段与PBS或者完全弗氏佐剂(CFA)按照1:1体积比例充分混匀制备成抗原油包乳剂混合液,模型组中每只小鼠双肩及双后足垫底部四部位分别给予合成免疫原50μL共计200μL(含有鼠源肽段50μg)。初次免疫应用包含完全弗氏佐剂(CFA)的合成免疫原进行小鼠免疫,第30天、第50天再次给予包含不完全弗氏佐剂(IFA)的合成免疫原进行加强免疫(配置方法、注射部位及计量同前)。在相同的时间、部位给予空白对照组小鼠相同剂量生理盐水进行注射。自首次免疫后第70天时进行模型鉴定,造模期间隔日测量并记录小鼠体重变化,参考Lennon的分级方法评价试验小鼠临床症状等级,模拟疲劳实验,给予新斯的明注射观察小鼠肌无力症状评分变化;采用酶联免疫法检测小鼠血清AChR-Ab滴度水平等指标评判EAMG小鼠模型是否成功。最终依照纳入标准有25只模型组小鼠造模成功,将其随机分成生理盐水组9只(0.2ml),激素组即醋酸泼尼松组8只(9mg/kg·d),中药组即健脾补肾方组8只(4.5g/kg·d),最终连同空白对照组10只(0.2ml),采用灌胃法每日分别给药或生理盐水,共治疗2周;期间记录各组小鼠体重变化以及肌无力症状评分,对于治疗前后小鼠血清IL-4、TNF-α滴度水平则采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。结果:根据模型纳入标准最终造模成功的EAMG小鼠共计25只。EAMG小鼠出现肌无力症状,并且其饮食减少,体重增长缓慢,甚者出现体重减轻;空白对照组小鼠饮食正常,行动灵活,无肌无力症状,体重稳步增长。在肌无力临床症状评分、血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)方面,模型组小鼠与空白对照组进行比较,统计学显示均具有显著差异性(P<0.01);行新斯的明实验后在肌无力改善方面,模型组小鼠给药后与给药前相比较存在显著的统计学差异(P<0.01)。经治疗2周后,同生理盐水组相比,健脾补肾方组及醋酸泼尼松组在临床症状评分明显降低、体重大幅度增长、血清AChR-Ab滴度降低、白介素IL-4以及TNF-α水平均降低;在体重变化及临床症状评分方面,健脾补肾方组及醋酸泼尼松组与生理盐水组相比较具有显著统计学差异(P<0.01);健脾补肾方组疗效略低于醋酸泼尼松组,组间比较存在统计学差异(P<0.01);健脾补肾方组与醋酸泼尼松组在IL-4、TNF-α水平变化方面与生理盐水组相比较,存在显著统计学差异(P<0.01);健脾补肾方组在IL-4、TNF-α滴度水平变化方面低于醋酸泼尼松组,组间对比较存在显著统计学差异(P<0.01)。结论:1.本实验采用合成免疫原鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫C57BL/6雌性易感小鼠制备EAMG动物模型与人类在临床症状、AChR—Ab等方面改变相似,初步确定此方法可以成功制备EAMG小鼠。为后期研究重症肌无力(MG)的发病机制及健脾补肾方的药效学提供了前期实验基础。2.健脾补肾方治疗重症肌无力有效,探索研究其机制可能是:通过降低外周血清中异常过高的IL-4、TNF-α水平,进而调节异常的AChR特异性免疫应答,抑制AChR-Ab的产生,减轻神经肌肉接头突触后膜的损伤,由此达到改善EAMG实验小鼠肌无力症状的效应。