论文部分内容阅读
蛋鸡脂肪肝出血综合征(Fatty liver hemorrhagic syndrome,FLHS)是一种易发于蛋鸡产蛋高峰期的营养代谢疾病,以肝脏肿大、肝脏脂肪变性和肝脏出血等为主要症状,对蛋鸡肝脏造成严重损伤的同时,导致蛋鸡产蛋率大幅下降、死亡率升高,每年对蛋鸡养殖行业造成巨大经济损失。蛋鸡FLHS属于非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD),其发病机制尚不清楚,但目前非酒精性脂肪性肝病发病机制比较认可的是“二次打击”学说。该学说认为首次打击为肝细胞脂质代谢紊乱、肝细胞内脂质异常堆积,二次打击为各种氧自由基及炎症介质的激活进一步导致了肝细胞的损害。胆汁酸是胆汁的主要成分,不仅在脂肪代谢中起到重要作用而且能够增强机体的抗氧化能力,并对急性、慢性炎症有明显的抑制作用。本课题组及前人研究表明,脂肪肝发生时胆汁酸水平明显下降,通过靶向激活胆汁酸相关信号通路对脂肪肝的防治均有一定益处。本试验拟通过饲喂高能低蛋白日粮制备FLHS蛋鸡模型,同时给予CDCA(鹅去氧胆酸,鸡胆汁酸的主要成分)干预,采取HE染色、荧光定量PCR、ELISA等方法,检测CDCA对肝脏病理变化、抗氧化能力、自噬以及KC细胞所介导炎性反应的影响,明确CDCA对FLHS蛋鸡肝脏炎症的作用,为应用胆汁酸防治蛋鸡FLHS的发生提供理论依据。选取产蛋率、体重相近的26周龄海兰褐蛋鸡216只,随机分为6组分:对照组、模型组、CDCA低剂量组、CDCA中剂量组、CDCA高剂量组和CDCA对照组,适应饲养1周后进行正式试验试验持续24周。试验结束后,采集肝组织及血液样本进行相关指标的测定。结果:1.采用高能低蛋白日粮成功建立FLHS蛋鸡模型。应用CDCA干预后蛋鸡肝脏出血迹象缓解、肝脏脂肪空泡减少、血清ALT、AST含量极显著降低,表明CDCA干预对蛋鸡FLHS的发生有明显的预防作用。2.CDCA干预后蛋鸡肝脏T-SOD、CAT、GSH-Px及T-AOC活性极显著升高,而MDA含量极显著降低,表明CDCA干预能够提高FLHS蛋鸡肝脏的抗氧化能力。3.CDCA干预后蛋鸡肝脏自噬标志物LC3Ⅰ、P62表达水平极显著降低,LC3Ⅱ、Beclin表达水平极显著升高,表明CDCA干预能够缓解FLHS蛋鸡肝脏自噬抑制。4.CDCA干预后蛋鸡肝脏M1型KCs标志物i NOS、CD68 m RNA表达量极显著降低;M1型KCs极化产物IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18、i NOS和TNF-α水平极显著降低;LPS-TLR4-Myd88-NF-kb信号通路中LPS、AP-1、IRF1、IRF5、casepase-11、NF-kb、Myd88和TLR4 m RNA表达极显著降低;JAK-STAT信号通路中IFN-γ、JAK2、STAT1和IRF5 m RNA表达极显著降低;促炎调控因子NLRP3、Casepase-1、Casepase-11 m RNA表达极显著降低;表明CDCA干预能够通过作用于LPS-TLR4-Myd88-NF-kb和JAK-STAT信号通路以及促炎调控因子抑制FLHS蛋鸡肝脏M1型KCs介导的促炎反应。5.CDCA干预后蛋鸡肝脏M2型KCs标志物CD206、CD163 m RNA表达以及IL-4和IL-10水平极显著升高;JAK-STAT信号通路SOCS1、ARG、IL-4R、PPARγm RNA表达水平极显著升高;表明CDCA能够通过作用JAK-STAT和相关调控因子促进FLHS蛋鸡肝脏M2型KCs介导的抗炎反应。本研究结果表明,鹅去氧胆酸能够缓解FLHS蛋鸡肝脏炎症反应,其机制可能是通过提高肝脏抗氧化和自噬水平、抑制M1型KCs型极化所介导的促炎反应及促进M2型KCs型极化所介导的抗炎反应。