论文部分内容阅读
脂蛋白酶(Lipoprotein lipase, LPL)在脂质的代谢与转运过程中起着重要的作用。LPL通过与脂蛋白相互作用,将脂蛋白锚定到血管壁,以促进脂蛋白颗粒的吸收,且LPL通过水解富含甘油三酯的脂蛋白还可以为重要组织提供脂质营养素。糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1 (Glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1, GPIHBP1)作为LPL重要的调控因子,其功能是既可以与LPL结合作为脂肪分解的平台,又可以作为LPL的载体参与其向毛细血管内皮细胞的转运。但GPIHBP1基因转录调控机理国内外迄今未见报道,因此,GPIHBP1基因启动子功能至今也未见研究。本研究拟通过对猪GPIHBP1基因启动子转录活性的初步研究,找到核心启动子区和启动子区的主要转录因子;通过对启动子区单核苷酸多态性的分析,找到与猪脂肪性状有关的多态位点。文章运用生物信息学、分子生物学、细胞学等实验方法对猪GPIHBP1基因启动子功能进行了研究,取得结果如下:1.获得了猪GPIHBP1基因5’端启动子区全长2232 bp的DNA序列,并成功构建了猪GPIHBP1基因不同启动子片段的重组载体:pGL3-95、pGL3-288、pGL3-490、 pGL3-1000、pGL3-1299、pGL3-1966。2.将构建好的不同启动子片段的载体分别转染PK15细胞,利用双荧光素酶报告基因系统对启动子活性进行分析发现:-490—+265区间的活性最强,预测是核心启动子所在区间;-95—+265区间具有基本启动子功能,推测这与SOX-9转录因子结合元件有关;在-95—-490和-1229—-1996区间存在正调控,推测这与STER、ADR1与c-ets-1等转录因子结合元件有关;-490—-1227区间存在负调,推测这与MyoD、HSF和Barbie Box转录因子结合元件有关。3.采用PCR产物直接测序法,对6个品种(藏猪、雅南猪、金华猪、凉山猪、长白猪和杜洛克猪)共56头个体的GPIHBP1基因启动子区序列进行直接测序。共筛选出11个SNPs位点,这些位点均位于转录起始位点上游,其中-903 G>C位点能被Sma Ⅰ限制酶识别。4.为进一步分析这些多态位点是否影响猪机体的脂肪代谢,我们在56头猪群体中,对GPIHBP1基因启动子区出现的11个SNPs与背膘厚进行了关联分析,结果发现-703 G>A位点与背膘厚存在显著相关性(P<0.05),此位点基因型分布在6个群体中存在极显著差异(P<0.01)。