论文部分内容阅读
目的:研究rhG-CSF动员前后造血干细胞移植供者的淋巴细胞各亚群绝对值及比例的变化情况。以指导对移植后急、慢性移植物抗宿主病和移植后患者免疫重建的预测。方法:1供者资料所有供者均经过外周血、骨髓及相关脏器功能检查未见明显异常,并签署相关知情同意书。2动员采集方案采用rhG-CSF10μg/kg q12h皮下注射进行动员。亲缘供者于动员第4天采集骨髓干细胞;第5天采集外周血干细胞;如采集数量未达到移植标准;则第6天继续动员、采集,直至满足移植所需细胞数。非血缘供者于第5、6天集外周血干细胞。3标本采集供者动员前和采集日上机采集前抽血送检血常规;记录其中白细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数。淋巴细胞免疫表型检测:针对外周血做研究的供者另于动员前及采集前留取外周血3ml;针对骨髓研究的供者于移植前查体阶段以及采集骨髓时各留取骨髓2ml。标本采集后即刻送检。4外周血淋巴细胞亚群检测采用流式细胞仪检测;检测动员前后供者外周血内CD3+T淋巴细胞(免疫表型CD3+,下同)、CD4+T淋巴细胞(CD3+CD4+)、CD8+T淋巴细胞(CD3+CD8+)、T调节细胞(CD3+CD4+CD25+FoxP3+)、初始CD4+T细胞(CD3+CD4+CD62L+CD45RA+CD45RO-)、记忆CD4+T细胞(CD3+CD4+CD45RO+)、初始CD8+T细胞(CD3+CD8+CD45RA+)、记忆CD8+T细胞(CD3+CD8+CD45RO+)B细胞(CD19+)、未成熟B细胞(CD19+CD10+CD27-CD38+)、初始B细胞(CD27+CD19+)、记忆B细胞(CD27+CD19+)的绝对值及比例。5骨髓淋巴细胞亚群检测对供者查体阶段及骨髓采集时的骨髓进行有核细胞计数,同时予fcm检测骨髓内t、b淋巴细胞百分比例:即cd3+细胞、cd19+细胞所占比例。进一步标记可以测出cd3+细胞群中cd4+、cd8+、cd4-cd8-细胞,以及cd4+cd25+细胞所占比例;cd28+阳性细胞所占cd4+细胞、cd8+细胞比例值,结合有核细胞计数结果得到各亚群细胞绝对值6统计学处理以spss21.0进行统计学分析,根据数据符合正态性与否选择配对样本t检验或wilcoxon秩和检验,以p<0.05作为有统计学意义的标准。结果:1供者动员采集情况:1.1所有供者动员、采集过程顺利,无严重不良反应发生。1.2动员效果:动员后供者外周血白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞计数、单核细胞计数均上升,但淋巴细胞绝对值上升不明显,动员前后白细胞计数为6.38±1.90×109/lvs46.83±8.51×109/l(p<0.001);中性粒细胞计数3.54±1.27×109/lvs42.80±7.99×109/l(p<0.001)、淋巴细胞计数2.21±0.89×10^9/lvs2.55±0.78×109/l(p=0.11)单核细胞计数0.45±0.16×109/lvs1.41±0.89×109/l(p<0.001)2动员前后外周血t细胞亚群比较2.1动员前后cd3+t细胞、cd3+cd4+t细胞、cd3+cd8+t细胞的绝对值出现有统计学意义的升高(p值均<0.001),而其各自所占百分比则均无统计学差异(p值依次为:0.785、0.376、0.757);动员前后外周血cd4/8比值也无明显统计学差异(p=0.757)。以上结果提示;g-csf动员后外周血中cd3+t细胞、cd3+cd4+t细胞、cd3+cd8+t细胞呈等比例增加。2.2动员后外周血treg绝对值较动员前稍有增高,但无统计学差异,所占淋巴细胞百分比也无统计学差异。(p值分别为0.061、0.924)2.3动员前后初始、记忆cd4+t细胞的比较:动员前后初始cd4+t细胞绝对值为:0.24(0.26)×109/lvs0.025(0.079)×109/l(p=0.003);百分比为:10.52±5.57%vs0.43(15.2)%(p<0.001)均呈有统计学意义的下降趋势;记忆cd4+t细胞绝对值增高(p<0.001),但百分比未见统计学差异(p=0.108)2.4动员前后初始、记忆cd8+t细胞的比较:动员前后外周血初始cd8+t细胞绝对值差异有统计学意义:0.30±0.17×109/lvs0.62±0.52×109/l(p<0.001);百分比未见统计学差异(p=0.80);动员前后外周血记忆cd8+t细胞绝对值差异有统计学意义0.30±1.17×109/lvs0.52±0.37×109/l(p<0.001);百分比未见明显统计学差异(p=0.407);提示这两类细胞亚群动员后为成比例增加3动员前后外周血b淋巴细胞亚群比较:3.1动员前后外周血总体b细胞绝对值和百分比均明显升高(p值均<0.001);3.2动员前后外周血未成熟b细胞绝对值升高为0.22(0.26)×109/lvs0.56(0.51)×109/l(p=0.009)有统计学意义;百分比为0.07(0.12)%vs0.12(0.14)%(p=0.158)无统计学意义3.3动员前后外周血初始b细胞明显增加:绝对值为0.26±0.16×109/lvs0.72±0.61×109/l(p<0.001);百分比为9.80±4.27%vs14.32±5.95%(p<0.001)。可能增加受者移植后的cgvhd风险。3.4记忆b细胞动员前后绝对值明显升高0.063±0.053×109/lvs0.14±0.13×109/l(p<0.001);百分比为2.55±1.86%vs2.73±1.99%(p=0.434)无统计学意义。这些结果表明,供者动员前后外周血各个阶段b细胞计数均有上升,但以初始b细胞为著。4动员前后骨髓内各细胞成分比较:4.1动员后供者骨髓有核细胞数明显增加:(p<0.001)4.2动员前后骨髓淋巴细胞数变化不明显:(p=0.445);显示动员后虽然骨髓增生明显活跃,但骨髓内淋巴细胞总数变化不大。4.3动员前后骨髓cd3+细胞比较:动员前后骨髓内cd3+t细胞绝对值为1.40(1.8)×109/lvs1.50(1.84)×109/l(p=0.333);百分比为69.76±6.22%、70.96±7.74%(p=0.588)均无明显统计学差异。4.4动员前后cd3+cd4+t细胞比较:动员前cd3+cd4+t绝对值为0.84(1.63)×109/lvs0.64(1.07)×109/l(p=0.047);47.60±9.90%vs41.00±7.72%(p=0.015)均呈有统计学意义的减少4.5cd3+cd8+t细胞:0.82(0.74)×109/l、0.85(0.71)×109/l(p=0.386);42.64±9.82%、48.71±9.03%(p=0.002)其绝对值无明显差异,而百分比明显升高。同时动员后骨髓cd4/8比值明显减低1.21±0.53vs0.89±0.31(p=0.012)4.6动员后dnt细胞的绝对值及百分比增高:0.14(0.26)×109/lvs0.17(0.28)×109/l(p=0.047);8.48±4.65%vs9.61±3.90%(p=0.218)4.7骨髓内cd4+cd28+细胞在动员后绝对值以及百分比均下降;分别为0.80(0.80)×109/lvs0.54(1.00)×109/l(p=0.037);96.74(6.78)%vs89.73(7.04)%(p=0.005);cd8+cd28+细胞所占绝对值及比例均未见统计学差异4.8骨髓内cd4+cd25+细胞在动员后绝对值及百分比呈下降趋势:分别为:0.06(0.14)×109/lvs0.02(0.05)×109/l(p=0.043)、2.62±1.32%vs1.18±0.55%(p=0.010)4.9骨髓内cd19+细胞在动员前后绝对值及百分比差异无统计学意义:(p值分别为0.333、0.714)5动员后骨髓与外周血淋巴细胞的比较5.1动员后bm与pb的淋巴细胞总数无统计学差异(p=0.303)5.2动员后bm与pb的cd3+t细胞有统计学差异(p=0.037),pb中cd3+t细胞中位数为bm内1.7倍;动员后bm与pb的cd3+cd4+t细胞数量有统计学差异(p=0.019),pb中cd3+cd4+t细胞中位数为bm内2.3倍;动员后bm与pb的cd3+cd8+t细胞数量无统计学差异(p=0.198)5.3动员后bm与pb的cd19+b细胞无统计学差异(p=0.198)结论:1g-csf动员后外周血及骨髓中淋巴细胞绝对值均无明显升高。2g-csf动员后外周血中cd3+t细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、t调节细胞、记忆cd4+t细胞、初始cd8+t细胞、记忆cd8+t细胞等t细胞各亚群绝对值升高,但这些t细胞亚群的百分比则无明显变化,初始cd4+t细胞的绝对值和百分比呈下降趋势。3g-csf动员后供者bm内cd4+细胞减少;bm内dnt细胞升高;降低了骨髓移植物的免疫反应性4g-csf动员后供者pb中总体b淋巴细胞绝对值及比例升高,以初始B细胞最为明显,增加了cGVHD的风险。