基于UniGene寻找山羊新的microRNA及其靶基因

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangdod
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microRNA (miRNA)是一类长约22nt的非编码小分子RNA,通过与靶基因互补发挥转录后水平的负调控作用。有关山羊的miRNA及其靶基因研究相对匮乏。识别和鉴定山羊miRNA及其靶基因,对于揭示miRNA在山羊基因表达调控中的作用至关重要。本论文根据miRNA在进化上的保守性,以已知动物的miRNA为搜索序列与山羊的UniGene进行BLAST比对来预测山羊新的miRNA分子,并通过荧光定量PCR分析这些miRNA分子在皮肤和肌肉中的表达情况;同时也筛选了这些miRNA对应的靶基因,并对这些靶基因的功能进行了分析。结果如下:1、通过基于UniGene的序列比对方法,预测得到了5条山羊miRNA分子(chi-miR-2284n、chi-miR-421*、chi-miR-421、chi-miR-1839(?)(?)chi-miR-374b;登录号:JQ002550-JQ002554),在山羊的皮肤和肌肉中均有表达,初步确定为山羊新的miRNA分子。其中chi-miR-374b、chi-miR-421(?)(?)chi-miR-421*构成了山羊miRNA基因簇,chi-miR-2284n是牛和山羊特异的。2、绒山羊不同月份皮肤miRNA的实时定量结果显示,在2月份山羊体内发生了十分重要的分子事件使得chi-miR-1839、chi-miR-374b(?)(?)chi-miR-2284n的表达量显著增高,可能促使绒山羊的次级毛囊从退行期进入休止期,绒毛停止生长。该发现为进一步研究与绒毛生长相关的基因奠定了一定的基础。3、chi-miR-421(?)(?)chi-miR-421*在皮肤和肌肉中都表达,且表达模式相同,即在10月份皮肤中的表达量显著高于其它月份的表达量,而绒生长的最快时期也为10月份,以此推测chi-miR-421和chi-miR-421*在10月份表达量的显著增高与促进绒毛生长有关联。4、利用鉴定出的5条新的miRNA序列,我们分别绘制了这5条miRNA分子在皮肤和肌肉中靶基因的图谱;对这些靶基因进行随机克隆测序得到了10条靶基因的序列,其中有两条靶基因是山羊特异的。
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