【摘 要】
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保加利亚乳杆菌被用于世界范围内各种发酵乳制品的生产,其在作为发酵剂的制备过程中,以及在实际的发酵过程中,渗透压、温度、p H和营养可用性的波动会限制菌体的分裂增殖能力从而降低其发酵性能,影响乳制品的质量和风味。目前,保加利亚乳杆菌在乳品发酵工业中常处于盐胁迫环境中,涉及乳酸菌盐胁迫下分裂机制的研究仅是对代谢相关基因和蛋白质变化的分析,而对菌体响应盐胁迫环境对分裂体的作用鲜有研究。本文通过研究保加利
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“盐胁迫下保加利亚乳杆菌分裂骨架形成及其分裂机制研究”(项目编号:31972972)
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保加利亚乳杆菌被用于世界范围内各种发酵乳制品的生产,其在作为发酵剂的制备过程中,以及在实际的发酵过程中,渗透压、温度、p H和营养可用性的波动会限制菌体的分裂增殖能力从而降低其发酵性能,影响乳制品的质量和风味。目前,保加利亚乳杆菌在乳品发酵工业中常处于盐胁迫环境中,涉及乳酸菌盐胁迫下分裂机制的研究仅是对代谢相关基因和蛋白质变化的分析,而对菌体响应盐胁迫环境对分裂体的作用鲜有研究。本文通过研究保加利亚乳杆菌盐胁迫下分裂体形成的变化,寻找调控分裂体的关键基因和途径并分析其对菌体分裂增殖的影响,以期提高盐胁迫下保加利亚乳杆菌的培养密度,同时也为进一步研究乳酸菌在胁迫环境下的分裂机制提供理论依据。通过对Lactobacillus bulgaricus sp1.1(sp1.1)耐盐性的测定,得出sp1.1分裂受阻临界Na Cl盐浓度为2%(w/v)。分析sp1.1分裂受阻时菌体形态、分裂环定位与形态、DNA复制和基因dna A与fts Z表达的变化。结果表明,临界Na Cl盐浓度胁迫不能阻止保加利亚乳杆菌的DNA复制,也不能扰乱分裂环的定位,但能通过下调基因fts Z和dna A的表达,抑制分裂环的组装,从而使菌体丝状化,细胞长度增加,染色体和分裂环累积,进而导致菌体分裂受阻。以临界Na Cl盐浓度下培养的sp1.1对数中期菌体细胞为实验组,正常培养条件下对应时期的菌体细胞为对照组进行转录组学测序。结果表明,保加利亚乳杆菌在Na Cl盐胁迫下通过多种策略交叉作用于分裂体来调节菌体细胞的分裂,从而使菌体适应盐胁迫环境下的生长。这些策略包括单组份系统丝氨酸/苏氨酸激酶(LDB_RS01240下调);ABC转运体(Opu A上调);修复DNA和蛋白质损伤(Dna A下调,Rec A、Lex A和Spx A上调);蛋白质降解(Clp P下调);伴侣蛋白表达(Dna J/K和Gro EL下调)的调节以及相关蛋白的交叉保护。通过转录组学的分析,总结得到sp1.1作用于分裂体的Na Cl盐应激反应网络。选择作用于分裂体的关键基因为LDB_RS01240,关键途径为单组份系统丝氨酸/苏氨酸激酶,并验证其对菌体分裂体的作用。结果表明,保加利亚乳杆菌在Na Cl盐胁迫下,Ser/Thr激酶过表达通过降低菌体细胞中DNA的累积,加速染色体的分离,从而缩短菌体的长度和细胞周期,减少分裂环的累积,促进分裂环的组装,进而增强菌体细胞的分裂增殖能力。
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