双峰驼是我国西北地区特有的动物,常年生活在自然环境较为恶劣的沙漠地带。已经公开的研究表明双峰驼有着独特的黏膜免疫系统,黏膜免疫系统在抵御外部病原入侵的过程中发挥着重要的作用,其中T细胞是参与保护反应的一类重要的效应细胞,但是关于双峰驼T细胞的研究未见报道。因此本文就双峰驼T细胞表面两类重要的分子CD3和CD4开展了生物信息学分析,重组蛋白的原核表达和多克隆抗体制备方面的研究。为获取CD3ε和CD4的重组蛋白和相应的多克隆抗体,首先在GenBank中查找收录的双峰驼CD3ε和CD4的核酸序列及氨基酸序列,利用生物信息学分析软件对CD3ε和CD4的跨膜区,信号肽及抗原指数和亲水性进行了预测,之后选取CD4和CD3ε膜外部分的氨基酸序列,并去除信号肽,人工合成这段氨基酸序列所对应的基因,经测序正确的基因片段被克隆至PET-28a(+)表达载体上,转入BL21(DE3)大肠杆菌中,然后诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白。将两种重组蛋白经过镍柱亲和层析纯化后分别免疫健康的雄兔以制备多克隆抗体,待四免后心脏采血并提取血清,ELISA检测CD3ε与CD4多抗的血清效价,WB检测抗体血清与各自抗原蛋白的结合效果。结果显示,(1)含有目的基因的原核表达载体构建成功,获得了符合预期大小的CD3ε与CD4的重组蛋白,两种蛋白均以包涵体的形式表达。(2)ELISA结果表明anti-CD3ε与anti-CD4的有效稀释浓度分别达到了1:32000和1:16000。(3)WB结果表明CD3ε和CD4重组蛋白可与各自的抗体血清发生特异性结合。综上所述,双峰驼CD3ε与CD4分子的重组蛋白可经原核表达系统成功表达;CD3ε与CD4具备在兔子体内刺激免疫系统产生抗体的能力,表明有良好的免疫原性。通过对双峰驼T细胞表面CD3ε和CD4分子的原核表达及多克隆抗体制备的研究,可以为双峰驼T细胞分化增殖,功能发挥,信号传导等的研究和进一步开发特异性抗体治疗双峰驼免疫系统相关疾病提供可供参考的资料。