人博卡病毒样颗粒的研制及初步应用

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2005年,瑞典学者首次报道在呼吸道疾病患者鼻咽分泌物中发现人博卡病毒1,随后,人博卡病毒2和人博卡病毒3又分别在急性迟缓型麻痹患儿和腹泻患儿的粪便中被相继发现。人博卡病毒是一类无包膜的单链线状DNA病毒,暂时划归为细小病毒科、细小病毒亚科、博卡病毒属。由于缺乏有效的体外细胞培养体系和动物模型,人博卡病毒与人类呼吸道或胃肠道疾病的临床关联尚且未知。因此,使用基因工程方法大量制备人博卡病毒抗原,建立相应的血清学检测方法,将有助于解开这些疑问。本研究使用昆虫细胞和杆状病毒表达载体系统表达人博卡病毒1、2和3衣壳蛋白VP2基因,重组衣壳蛋白VP2部可以自行组装成病毒样颗粒,使用纯化的人博卡病毒样颗粒建立酶联免疫吸附试验,检测200份西安地区健康婴儿、176份北京地区健康人血清中人博卡病毒1、2和3的IgG和IgM水平,以及373份日本福冈地区健康人血清中人博卡病毒1的IgG水平。电泳及透射电镜结果显示,大量分子量约为60.5kD的蛋白释放入培养上清中,重组蛋白可以自行组装成不含核酸的空心病毒样颗粒,这些病毒样颗粒平均直径为22nm,颗粒密度约为1.31g/ml。人博卡病毒血清流行病学结果显示,婴儿中人博卡病毒1、2和3的IgG阳性率分别为20.0%、14.0%和13.5%;而10岁以上人群中人博卡病毒1、2和3的IgG阳性率升高至75.6%、44.3%和42.0%;但是日本福冈地区人博卡病毒1的IgG阳性率超过80%。与IgG流行趋势相反,婴儿中人博卡病毒的IgM阳性率明显高于成年人群。昆虫细胞和杆状病毒表达载体系统可以有效表达人博卡病毒1、2和3衣壳蛋白VP2,并自行组装成病毒样颗粒。人博卡病毒在普通人群中广泛流行,成年人群中人博卡病毒的IgG的阳性率很高。
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