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广义的胃黏膜屏障(gastric mucosal barrier)是指由胃黏液屏障、上皮层屏障、黏膜微循环、黏膜免疫屏障和黏膜修复功能等因素构成的复杂的网络系统。当胃黏膜攻击因子增强或胃黏膜屏障功能减弱时，可导致胃黏膜病变发生，轻则出现水肿、充血等炎症反应，重则发生糜烂、溃疡甚至肠化生和不典型增生，患者表现为上腹痛、腹胀、食欲减退、恶心、呕吐等，中医辨证论治属“胃痛”、“痞满”、“嘈杂”等。脾虚证是上述各种脾胃疾病发生发展过程中最常见的病机过程，也是临床最常见的证候类型。因脾胃同居中焦，生理相关，病理相连，脾（气）虚则脾失健运，胃失和降，故见胃脘胀闷、疼痛、纳差、恶心、呕吐等，这些症状也恰恰是胃黏膜疾病最常见的症状。由此可见，胃黏膜屏障受损所致疾病可辨证为中医脾虚证，而脾虚证的症状也与胃黏膜疾病的临床表现相吻合，提示二者存在一定的相关性。因此，探讨脾虚与胃黏膜屏障功能之间的关系，对防治胃黏膜疾病具有实际的临床意义。目的：本研究采用耗气破气药物、饥饱失常和劳倦过度三因素复合造模法复制脾虚证大鼠模型，以期探索更符合脾虚证临床特点的造模方法。通过对大鼠胃黏膜组织黏蛋白、黏膜T细胞亚群和上皮细胞凋亡等构成胃黏膜屏障功能的各层级指标进行检测，探索脾虚证与胃黏膜屏障功能改变之间的相关性以及健脾益气方剂四君子汤改善胃黏膜屏障功能的作用机制，为健脾益气法的临床应用和中药胃黏膜保护剂的研制提供实验依据，为胃黏膜疾病的中西医结合治疗提供理论依据。材料与方法：1.采用耗气破气药物、饥饱失常和劳倦过度三因素复合造模法复制脾虚证大鼠模型并分组治疗。102只健康SPF级SD大鼠，适应性饲养l周后，随机分成4组，正常对照组（24只）、长期造模组（26只）、自然恢复组（26只）和四君子汤组（26只）。正常对照组常规饲养7周，前4周给予生理盐水隔日1次灌胃，后3周每日1次灌胃（1.5ml/100g）。其余三组均采用耗气破气药物、饥饱失常和劳累三因素复合造模法复制脾虚证大鼠模型，即耗气破气药物(1.5ml/100g)隔日1次灌胃，灌胃当日禁食，次日足量喂食且游泳至耐力极限。造模4周结束后，长期造模组继续造模3周，自然恢复组继续常规喂养3周，四君子汤组也改为常规喂养，同时给予四君子汤每日1次灌胃3周（1.5ml/100g）。于第7周末处死所有大鼠，取材处理。2.检测大鼠胃黏膜组织中黏蛋白的变化：采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠胃黏膜组织中MUC5ACmRNA的相对表达量，并用western blot法检测胃黏膜组织中MUC5AC蛋白表达。3.检测大鼠胃黏膜组织T细胞亚群的变化：用免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜组织中CD4+、CD8+T细胞数量及CD4+/CD8+比值的变化情况。4.检测大鼠胃黏膜细胞凋亡：用TUNEL法检测各组大鼠胃黏膜细胞凋亡情况，并用免疫组织化学方法检测调控蛋白Caspase-3的表达情况。结果：1.大鼠外观行为学观察长期造模组、自然恢复组及四君子汤组大鼠开始造模7天左右逐渐出现背毛枯乱、无光泽；懒动、蜷缩、扎堆、眯眼等兴奋度降低的表现；大部分出现便溏或大便偏软、偏湿，个别出现黏液便，2周后逐渐出现肛周污秽，个别有阴囊水肿，多数大鼠食量减少，消瘦。长期造模组以上表现持续至实验结束，且毛发枯乱、蜷缩、便溏等症状逐渐加重，部分大鼠出现水样便或黏液脓血便，脱肛、阴囊水肿。自然恢复组在停止造模后，兴奋度提高，不再有黏液便，但仍有便溏，其余表现无明显好转。四君子汤组停止造模1周左右上述变化逐渐改善，实验结束时外观、兴奋度、大便等基本恢复正常。正常对照组外观和行为学表现正常，无上述改变。2.大鼠体重增长及游泳耐力与正常对照组相比，长期造模组和自然恢复组体重增长和游泳耐力均值均下降（P＜0.05），四君子汤组与之比较并无统计学差异（P＞0.05）。长期造模组与自然恢复组体重差值和游泳耐力较之正常对照组均有明显差异（P＜0.05），但此两组体重差值比较并无差异（P＞0.05）。3.大鼠脾指数和胸腺指数长期造模组和自然恢复组的脾指数与正常对照组相比显著降低(P＜0.05)，四君子汤组脾指数与正常对照差异不显著(P＞0.05)；与四君子汤组相比，长期造模组脾指数显著降低(P＜0.05)，自然恢复组无明显降低(P＞0.05)。各组大鼠胸腺指数与正常对照组相比，只有长期造模组显著降低(P＜0.05)，自然恢复组与四君子汤组与之无显著差异(P＞0.05)；与四君子汤组相比，长期造模组显著降低(P＜0.05)，自然恢复组与之无显著差异(P＞0.05)；与自然恢复组相比，正常对照组、长期造模组和四君子汤组胸腺指数均与之无差异(P＞0.05)。4.胃黏膜组织MUC5ACmRNA及蛋白表达与正常对照组相比，长期造模组和自然恢复组MUC5ACmRNA相对表达量均明显下降（P＜0.05），但四君子汤组与之比较无明显差异（P＞0.05）；自然恢复组与长期造模组相比虽显著升高（P＜0.05），但较之四君子汤组和正常对照组均有显著差异（P＜0.05）。与正常对照组比较，长期造模组、自然恢复组MUC5AC蛋白表达明显减少（P＜0.05），在给予四君子汤后，MUC5AC明显升高且与正常组比较并无差异（P＞0.05）；自然恢复组MUC5AC表达虽高于长期造模组（P＜0.05），但仍低于正常对照组与四君子汤组（P＜0.05）。5.胃黏膜组织T细胞亚群与长期造模组和自然恢复组相比，四君子汤组大鼠胃黏膜CD4+T细胞数量增加，CD8+T细胞数量减少，差异显著（P＜0.05）。四君子汤组CD4+T细胞数量的改善未恢复到正常对照组水平（P＜0.05），而CD8+T细胞的数量与正常对照组比较无明显差异（P＞0.05）。与正常对照组相比，四君子汤组、自然恢复组和长期造模组CD4+/CD8+比值依次降低（P＜0.05），长期造模组最低，自然恢复组和四君子汤组较之明显升高（P＜0.05），四君子汤组显著升高后仍低于正常对照组（P＜0.05）。6.胃黏膜上皮细胞凋亡及Caspase-3的表达与正常对照组比较，各组大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡均增加，尤以长期造模组增加显著，差异有统计学意义(P＜0.05)。经四君子汤治疗后，大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡明显减少，与长期造模组及自然恢复组比较有显著差异（P＜0.05）。与正常对照组比较，各组大鼠胃黏膜组织Caspase-3均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。经四君子汤治疗后，大鼠胃黏膜组织Caspase-3含量明显降低，与长期造模组及自然恢复组比较有显著差异（P＜0.05）。结论：1.耗气破气药物、饥饱失常和劳倦过度三因素复合造模方法复制的脾虚证大鼠模型，稳定性更强，停止造模因素后大鼠各项脾虚表现不易自行恢复，更符合脾虚证慢性难愈的临床特点。2.脾虚证大鼠胃黏膜组织中黏蛋白MUC5AC含量减少，CD4+T细胞减少，CD8+T细胞增多，CD4+/CD8+比值降低，Caspase-3表达及上皮细胞凋亡增加，提示其胃黏膜黏液屏障、黏膜免疫屏障以及黏膜修复功能受损，胃黏膜屏障功能减弱。3.四君子汤可能通过提高大鼠胃黏膜黏蛋白含量、调整胃黏膜组织中T细胞亚群和减轻胃黏膜上皮细胞凋亡等途径而改善胃黏膜屏障功能，进而反证脾虚证可导致大鼠胃黏膜屏障功能减弱，脾虚与胃黏膜屏障功能存在一定的相关性。