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自闭症也称为孤独症,是由于神经系统失调而导致的发育障碍,自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder, ASD)包括一系列神经发育疾病,主要表现出三种特征：社会交往和语言交流障碍,重复刻板的行为和狭隘兴趣。Shank3基因的突变被认为是ASD中神经发育和神经行为不良的重要原因。在本研究中,我们将探讨使用新的基因编辑技术(gene editing technology) ——CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9),结合优化了的食蟹猴辅助生殖技术(assisted reproductive technologies, ARTs),初步研究制备携带与人类遗传突变有关的自闭症基因修饰食蟹猴。本实验进行了食蟹猴重复超排研究。使用重组人促卵泡激素(recombinant human follicular stimulation hormone, rhFSH)对食蟹猴全年进行重复超排。对128只成年食蟹猴每天早晚两次肌肉注射1.375μg rhFSH,连续8天,第9天肌肉注射83.3μg hCG (human chorionic gonadotropin, hCG)。首次超排研究发现,在一年的春(1-3月)夏(4-6月)秋(7-9月)冬(10-12月)四个季节中,卵巢应答和卵巢收集均无显著性差异。经过首次超排后,第一次月经周期变短,第二次月经周期则变长,第三(28.5±2.8天)、四次月经周期(27.8±3.4天)则恢复到与超排前月经周期(28.6±3天)一致。因此间隔2、3、4个月经周期对食蟹猴进行再次超排,卵巢应答和卵巢收集均与第一次超排结果相似,均无显著性差异。首次超排结果可以预计后面两次重复超排,经过前四次重复超排,较好应答的食蟹猴卵巢收集均无显著性差异,每次超排取卵数分别为39.8±24.3,33.8±11.9,35.4±26.9,37.4±20.4。但是第五次重复超排效果则比前四次显著降低。总之,食蟹猴全年任何时期都可以启动超排,间隔两个月经周期可以再次进行超排,每只食蟹猴可以至少重复四次超排。本研究使用CRISPR/Cas9基因修饰载体对食蟹猴胚胎基因组的shank3基因进行靶向敲除。通过对食蟹猴1细胞胚胎共注射Cas9 mRNA和sgRNA,经体外培养后,得到3枚桑椹胚或囊胚,通过T7EN1酶切实验以及sanger测序均检测到位点特异性修饰,说明CRISPR/Cas9工程核酸酶可以有效地对食蟹猴胚胎进行基因修饰,为后期研制shank3基因敲除食蟹猴提供重要佐证。