【摘 要】
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博落回[Macleaya cordata(Willd.)R.Br.]属于罂粟科、博落回属的多年生草本植物,其主要活性成分是异喹啉类生物碱(Isoquinoline alkaloids),包括血根碱(Sanguinarine,SAN)、原阿片碱(Protopine,PRO)、别隐品碱(Allocryptopine,ALL)、白屈菜红碱(Chelerythrine,CHE)等,具有良好的调节肠道、抑菌
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博落回[Macleaya cordata(Willd.)R.Br.]属于罂粟科、博落回属的多年生草本植物,其主要活性成分是异喹啉类生物碱(Isoquinoline alkaloids),包括血根碱(Sanguinarine,SAN)、原阿片碱(Protopine,PRO)、别隐品碱(Allocryptopine,ALL)、白屈菜红碱(Chelerythrine,CHE)等,具有良好的调节肠道、抑菌、抗炎促生长的功效。博落回提取物在我国已开发为2个国家二类新中兽药,作为天然源替抗产品远销全世界45个国家和地区。随着欧盟、美国、中国等全球主要国家和地区迈入了“后抗生素时代”,未来对于博落回提取物的需求量将急剧增加。博落回主要来源于野生资源,随着市场需求的扩大,野生资源急剧减少,野生变家种成为解决博落回资源的重要途径。伴随博落回家种规模的扩大,许多种植基地频繁出现病害问题,其中由真菌感染引起的病害是影响博落回生产的重要原因。因此,本研究调查了湖南省博落回真菌性病害的发生种类,对博落回真菌性病原真菌进行了形态学和分子生物学鉴定,鉴定新病害3种,进一步以根腐病为研究对象,对其病原菌环境适应性和根际土壤微生物群落差异展开研究,并对病原菌筛查化学药剂和拮抗菌进行有效防治。具体结果如下:1.博落回真菌性病害调查结果:经过调查,确定湖南省博落回主要真菌性病害包括根腐病、茎腐病、叶斑病,其中根腐病发生最普遍。根腐病集中发生在6~9月,发病率在1.5%~39.42%之间,呈现2个发病高峰期。第一个高峰期在6月初~7月初发生,发病后根茎部产生白粉色或灰白色菌丝;第二个高峰期发生在7月中旬~9月,根茎部有白色绢花缠绕。茎腐病集中发生在3~5月,发病率在3.0~21.2%,后期茎部腐烂地上部分倒伏,发病部位产生白色菌丝和黑色菌核。叶斑病呈现两种发病症状:一种症状在初期表现为叶片背面出现灰褐色斑点,病斑逐渐扩大并延伸至正面,形成深褐色病斑,后期整个叶片出现病斑性坏死;另一种症状初期叶片产生浅黄色斑点,后期斑点扩大变成黑褐色斑点,最终整个叶片枯萎脱落。2.博落回真菌性病害病原菌鉴定结果:根据致病性测定、致病菌形态特征观察和基于多基因序列分析等结果,我们鉴定了尖孢镰刀菌、富士镰刀菌为根腐病第一阶段的病原菌,齐整小核菌为第二阶段根腐病病原菌;核盘菌为博落回茎腐病病原菌;果生刺盘孢菌和暹罗刺盘孢菌为博落回炭疽型叶斑病病原菌,其中暹罗刺盘孢菌是主要致病菌,链格孢和极细链格孢为黑斑型叶斑病的病原菌,其中极细链格孢为主要致病菌。3.博落回根腐病病原菌主要生物学性状研究:病原菌在25℃或30℃下生长最佳,光照与黑暗对菌丝生长无显著影响,对菌核和孢子形成有影响,半光照利于病原菌菌核或分生孢子的形成,3种病原菌的菌丝、菌核或分生孢子最低致死温度≥52℃,中性或偏酸性条件适宜病原菌的生长。4.博落回根际土壤微生物群落结构特征:选择博落回根际土壤为研究样本,分别对健康与根腐病博落回根际土壤的微生物群落结构进行比较分析,其中根际土壤真菌群落特征如下:(1)染病后,博落回根际土壤的真菌α多样性降低,真菌α多样性可以作为博落回根腐病发生与否的生物指标。(2)根腐病和健康博落回根际土壤真菌群落分为两大支,根腐病发生与否是影响博落回根际土壤真菌群落结构差异的主要因素。(3)染病样品中潜在病原真菌(如镰刀菌属、新赤壳菌属)的增加,是根际微生物环境从“健康”变为“疾病”的原因之一。(4)根际土壤中总钾的含量与健康博落回根际土壤真菌群落正相关。根际土壤细菌群落特征如下:(1)博落回染病后在高病情指数地区土壤根际细菌α多样性降低,它可以作为判断博落回根腐病发病轻、重的生物指标。(2)不同区域的博落回根际土壤细菌群落分为两大支,空间因素是博落回根际土壤细菌群落结构差异的主要影响因素。(3)低发病地区的根际土壤中,出现了几丁质菌、黄杆菌这样的抑病性细菌类群,而高发病地区的根际土壤中,富集了类似于假单胞菌等潜在致病菌。(4)根际土壤中总钾的含量与健康博落回根际细菌群落正相关。5.博落回根腐病病原菌防治:对博落回根腐病病原菌齐整小核菌进行化学药剂和生防菌筛选,筛选出肟菌·戊唑醇、阿米妙收、阿米西达、凯润·吡唑醚菌脂对病原菌菌丝生长和菌核形成有较好抑制效果,同时筛选到一株对病原菌生长有抑制效果的生防真菌BLH-G1,被鉴定为绿木霉(Trichoderma virens),为博落回病害的田间防治提供了指导。
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