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第一部分异丙酚通过激活ERK信号通路减少H2O2引起的L02肝细胞凋亡目的:已有报道证明异丙酚在缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion I/R）中对一些重要脏器具有保护作用,但是对肝细胞的作用报道甚少。此外,最近的研究显示ERK信号通路在氧化应激中发挥重要作用。因此我们用H2O2诱导L02人肝细胞氧化损伤,观察异丙酚预处理对L02细胞的影响并且进一步检测ERK通路在其中的作用。方法:①L02细胞经异丙酚预处理后被H2O2诱导凋亡,用TUNEL法及Caspase-3切割程度来检测细胞凋亡。②用蛋白质印迹技术检测ERK及MEK的磷酸化情况。③通过实时定量PCR技术检测Bcl-2,Bcl-xL,Bad和Bax的mRNA表达量变化。结果:在H2O2诱导的凋亡过程中,经异丙酚预处理的L02细胞凋亡数量及Caspase-3切割量均明显减少。并且这种减少与异丙酚的剂量成正相关:当异丙酚剂量用至0.3 mM时,细胞的凋亡程度被降至最低。与此一致的是ERK的磷酸化被显著激活。单用不同浓度的异丙酚（0.01-0.3 mM）处理细胞,检测到浓度依赖性的ERK及MEK磷酸化升高。不同时间点（0-4 h）收获经异丙酚处理的细胞,发现ERK及MEK在0.5h内就可以被激活,随后逐渐降低,至4 h时,ERK及MEK的活性下降到峰值时的一半。用特异性的MEK抑制剂PD98059处理细胞,完全抑制异丙酚诱导的ERK活性,并且加重了细胞的凋亡程度。异丙酚预处理减少了促凋亡基因Bad和Bax的mRNA表达,并且这种抑制作用可以被PD98059逆转。结论:我们的研究提示异丙酚对H2O2诱导的人肝细胞凋亡具有保护作用,并且这种保护作用至少部分是通过激活ERK信号通路进而抑制Bad和Bax的表达起作用的。第二部分异丙酚激活内质网应激关键分子Grp78目的:我们第一部分研究发现异丙酚对过氧化氢引起的人肝细胞凋亡具有保护作用。但异丙酚如何调节ERK活性,ERK发挥作用的途径有哪些,目前尚不了解。现有的一些文献报道了氧化应激可以引起内质网应激而导致细胞凋亡,而ERK可以上调内质网应激的关键分子葡萄糖调节蛋白78（Glucose regulated protein78,Grp78）的表达,Grp78对抗内质网途径的凋亡有着重要的作用。因此,我们分析异丙酚的作用是否与内质网应激有关,即是否影响了内质网上特异性蛋白质分子的表达。方法:用0.01-0.3mM异丙酚预处理L02人肝细胞,检测异丙酚预处理对内质网应激相关分子伴侣蛋白Grp78、Grp94、PDI及Calnexin表达的影响;构建Grp78启动子驱动的萤火虫（Photinus pyralis）荧光素酶报告质粒;Grp78启动子驱动的萤火虫荧光素酶质粒与CMV启动子驱动的海肾（Renilla reniformis）荧光素酶质粒共转染L02细胞,检测不同浓度的异丙酚对Grp78启动子活性的影响。结果:蛋白印迹检测发现异丙酚处理后Grp78、Grp94及PDI的蛋白质表达水平均上调,其中Grp78的表达增强尤为显著;成功构建了Grp78启动子驱动的荧光素酶报告质粒;荧光素酶活性测定结果显示异丙酚上调Grp78启动子驱动的荧光素酶活性。结论:我们的研究提示异丙酚可以激活内质网应激系统相关分子伴侣蛋白的表达,特别是显著激活内质网应激系统上游的关键分子Grp78。启动子活性测定发现异丙酚通过转录水平的上调从而最终增加了Grp78蛋白质水平的表达。第三部分异丙酚抑制大鼠神经干细胞的体外增殖目的:麻醉药对神经系统有深远的作用,而大部分研究都集中在对围手术期认知功能的短暂阶段评估。事实上,麻醉药也影响了神经前体细胞向神经元发育这个过程。最近有报道内源性神经前体细胞在脑外伤后被激活,但自我修复的分子机制并不清楚。由于对细胞有抗缺血再灌注损伤的保护作用,异丙酚常被使用在神经外科手术中,然而它在神经前体细胞中的作用尚未被阐述。因此,我们以体外培养的大鼠神经干细胞为模型研究异丙酚对神经干细胞增殖的影响。方法:从孕14.5天胎鼠前脑分离培养大鼠神经干细胞,细胞免疫荧光检测神经干细胞分化前后相关标志基因的表达;用0-0.05 mM的异丙酚处理神经干细胞,MTS及BrdU掺入法检测细胞生长与增殖情况;流式细胞测定神经干细胞的细胞周期分布情况;TUNEL法及PARP蛋白印迹检测细胞的凋亡情况;RT-PCR检测GABAA受体亚基的表达;蛋白印迹检测蛋白激酶Chk1及Chk2的磷酸化激活情况。结果:成功分离并获得单层贴壁培养的神经干细胞,细胞免疫荧光证实细胞表达神经干细胞的标志抗原蛋白巢蛋白（Nestin）,在特定条件下可以分化为TuJ阳性的神经元及GFAP阳性的星型胶质细胞。MTS检测显示异丙酚抑制神经干细胞的体外生长;BrdU掺入及细胞周期分析显示异丙酚使细胞停滞在S期;TUNEL及PARP蛋白印迹测定显示异丙酚并不导致凋亡;异丙酚增强Chk1-Ser317的磷酸化;GABAA受体特异性拮抗剂Bicuculline可以部分阻断异丙酚的这些作用。结论:异丙酚对体外培养的胚胎神经干细胞增殖具有抑制作用,使细胞停滞在S期。这种作用至少部分是通过激活GABAA受体以及随后激活Chk1通路发挥效应。