实时RT-PCR法检测非小细胞肺癌淋巴微转移

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[目的]:荧光实时RT-PCR(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)相对定量检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者癌旁组织中血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)mRNA及血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR-3)mRNA的表达及手术切除区域淋巴结人类肺特异性X蛋白(lung-specific X protein,Lunx)mRNA的表达,探讨荧光实时RT-PCR相对定量检测非小细胞肺癌微转移的实用性及Lunx、VEGF-C、VEGFR-3作为分子标志物的敏感性。[方法]:1.研究对象从2004年9月1日-2005年10月31日在山东大学第二医院胸外科住院的NSCLC手术患者中随机选取30例,其中男20例,女10例,年龄41岁~75岁。入选病例排除心、肝、肾功能不全,全身情况差及术前检查中发现远处转移者。按国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的pTNM分期标准行TNM分期,Ⅰ期10例,Ⅱ期9例,Ⅲ期11例。对照组20例肺部良性病变及20枚肺部良性病变切除的淋巴结来源于同期山东大学第二医院呼吸内科和胸外科住院患者。所有入选病例,患者的知情同意书已签。2.Lunx mRNA、VEGF-C及VEGFR-3mRNA表达检测1)以肺部良性病变切除的组织20例为对照组,检测VEGF-C mRNA、VEGFR-3 mRNA在30例癌旁组织中的表达,与常规病理比较其检测敏感性;2)以肺部良性病变切除的20枚淋巴结为对照,采用SYBR GreenⅠ嵌合荧光实时RT-PCR法检测NSCLC患者手术切除区域淋巴结60枚Lunx mRNA表达,并与常规病理比较;3)比较癌旁组织中VEGF-C mRNA(+)和VEGFR-3 mRNA(+)的患者与癌旁组织中VEGF-C(-)mRNA和VEGFR-3 mRNA(-)的患者局域淋巴结Lunx阳性的表达率,评价癌旁组织VEGF-C mRNA、VEGFR-3 mRNA表达与局域淋巴结Lunx mRNA表达的关系。[结果]:1) 30例NSCLC患者癌旁组织VEGFR-3 mRNA、VEGF-C mRNA表达的阳性率分别为60%(18/30)、77%(23/30),与病理阳性率37%(11/30)比较,均有显著差异(x~2=4,P<0.05;x~2=6.72,P<0.01);2) 60枚NSCLC患者手术切除区域淋巴结Lunx阳性率为78.3%(47/60),与病理阳性率55%(33/60)比较有显著差异(x~2=7.68,P<0.01);3)当患者癌旁组织表达VEGF-C(+)和VEGFR-3(+)时,从该类患者切除的局域淋巴结Lunx阳性表达率73.3%(44/60)明显高于从癌旁组织中VEGF-C(-)和VEGFR-3(-)患者切除的局域淋巴结Lunx阳性的表达率5%(3/60),两组比较有显著差异(x~2=6.50,P<0.05)。[结论]:VEGFCR-3、VEGF-C、Lunx均可作为NSCLC患者淋巴微转移的分子标志物,与病理比较有较高的敏感性;实验采用一种新颖的荧光实时RT-PCR相对定量方法分析结果,是一种简单客观敏感的检测肿瘤微转移的方法,有助于早期肺癌淋巴转移的检测。
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