连翘叶功能性成分的β-环糊精在线提取及生物活性研究

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连翘叶(Forsythia suspense leaves)是著名中药“连翘”原植物的叶片部分,每年仅有少部分连翘叶制成连翘叶茶食用,大部分连翘叶被丢弃,造成资源浪费。连翘叶中含有丰富的活性物质,对连翘叶中活性物质进行提取分离是开发连翘叶资源的重要方式之一。传统提取方式费时、成本高、污染严重,并且提取的连翘叶中活性物质存在不稳定、水溶性低等问题,限制其应用。因此针对上述问题,本研究基于环糊精辅助包埋提取,开发了一种绿色且低成本的连翘叶活性成分提取工艺。具体研究成果如下:(1)利用单因素与响应面法对环糊精辅助提取连翘叶活性物质进行工艺优化。最佳提取工艺为:连翘叶与β-环糊精(β-CD)的比例为3.61∶5(w/w),料液比为1∶36.3(w/v),温度为75.25℃,p H值为3.94。该工艺连翘酯苷A、连翘苷和连翘脂素的提取得率分别为11.80±0.141%、5.49±0.078%和0.32±0.004%,比纯水提取分别提高了14.16%、22.47%和52.77%。通过一系列表征技术证明了连翘叶天然活性产物与β-CD有显著的相互作用。最后对环糊精辅助提取物中各活性成分进行检测,确定其含量。(2)对环糊精辅助提取物的热稳定性、水溶性和生物活性进行了评估。在80℃下环糊精辅助提取物(FSE-β-CD)水溶液中连翘酯苷A的损失率比纯水提取物(FSE)减少了13%;FSE-β-CD的水溶性比FSE显著提高了94倍。并且经β-环糊精包合后,其抗氧化能力有所增强,清除DPPH和ABTS自由基的EC50分别下降了20.8%和4.3%;胰脂肪酶抑制活性也有所提高,其IC50相比FSE减少43.9%。并且环糊精的添加依然保持着连翘叶提取物的细胞损伤修复能力;经过体外消化后,FSE-β-CD中连翘酯苷A的损失率较FSE减少5%,消化后的抗氧化活性也有所改善。(3)选择β-环糊精及其衍生物(羟丙基-β-糊精和二甲基-β-糊精)对连翘叶中标志性化合物连翘苷(philyrin)进行包埋,以研究二者相互作用机理。结果表明,连翘苷与三种环糊精是以1∶1的化学计量比进行包合,包合物是通过连翘苷上的两个苯环结合到环糊精的空腔上而形成。结果还表明,制备的三种包合物均有较好的载药率与包合率。并且经环糊精包合后连翘苷水溶性、抗氧化能力与抑菌能力均有所提高。
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