【摘 要】
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研究背景:肾细胞癌简称肾癌,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,约占人类所有恶性肿瘤的3.5%。由于肾癌对放疗和化疗均不敏感,使得转移性肾癌患者的临床预后普遍较差。肿瘤干细
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研究背景:肾细胞癌简称肾癌,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,约占人类所有恶性肿瘤的3.5%。由于肾癌对放疗和化疗均不敏感,使得转移性肾癌患者的临床预后普遍较差。肿瘤干细胞与肿瘤的发生、生长、转移、复发、治疗抵抗关系密切。消除肿瘤干细胞可能会从根本上治愈肿瘤。目前已经确定的肾癌危险因素包括吸烟、高血压和肥胖等。香烟烟雾中含有众多致癌物,研究表明其可通过不同的分子机制促进肿瘤发展。转录因子Nanog在维持与调节肿瘤干细胞特性中发挥重要的作用。研究发现Nanog的表达水平与肾癌患者预后呈负相关关系。然而,有关Nanog在肾癌干细胞中的作用及吸烟对肾癌干细胞影响的研究鲜有报道。研究目的:本研究主要探讨Nanog在香烟烟雾暴露诱导肾癌干细胞特性增强过程中的调控作用。研究方法:(1)通过免疫组化染色法(IHC)和蛋白印迹法(Western blot)检测吸烟与不吸烟肾癌患者肿瘤组织样本中Nanog的表达水平。(2)利用无血清培养基富集培养肾癌干细胞,并根据干细胞球的体积、数目及干细胞标志物(Nanog,CD133,CD44,Oct4,ALDH1A1)的表达水平评价干细胞特性。(3)利用质粒转染的方法使肾癌细胞过表达Nanog,然后通过无血清培养探究干细胞特性变化。(4)香烟混悬液连续处理肾癌细胞8周,然后无血清培养,流式检测CD133+细胞比例和细胞周期分布、Western blot检测干细胞标志物及细胞增殖相关蛋白(Cyclin D1和PCAN)表达情况来评价干细胞活性变化。(5)通过转染si RNA干扰香烟混悬液处理后的肾癌细胞中Nanog表达,并分析干细胞活性变化。研究结果:(1)IHC和Western blot结果均显示:与不吸烟肾癌患者相比,吸烟患者肿瘤组织中Nanog的表达水平明显升高。(2)ACHN和786-O肾癌细胞在无血清条件下生长聚集成细胞球,而在正常含血清培养基中呈贴壁生长,并且细胞球的干细胞标志物(Nanog,CD133,CD44,Oct4,ALDH1A1)的m RNA和蛋白表达水平均明显高于贴壁细胞。(3)过表达Nanog促进了ACHN和786-O细胞在无血清条件下干细胞球的形成,并促进干细胞标志物(CD133,CD44,Oct4,ALDH1A1)表达。(4)香烟混悬液处理使ACHN和786-O细胞在无血清培养条件下形成体积更大、数目更多的干细胞球,增加了ACHN细胞中CD133+细胞比例,上调了干细胞标志物(Nanog,CD133,CD44,Oct4,ALDH1A1)的表达,并促进成球细胞细胞周期从G1期向S期转变及细胞增殖相关蛋白的表达。(5)干扰香烟混悬液处理后的ACHN和786-O细胞中Nanog表达则削弱了香烟混悬液处理对肾癌干细胞活性的促进作用。结论:本研究说明了Nanog在肾癌干细胞及吸烟诱导肾癌干细胞活性增强过程中起调控作用。
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