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最近有关西方国家前列腺癌的研究证实,SPINK1过表达为ETS基因融合阴性的前列腺癌病例中侵袭性较强的一种分子亚型,然而SPINK1对前列腺癌肿瘤细胞侵袭转移发挥作用的具体机制尚未明确。我们收集了224例前列腺癌病例,证实在中国前列腺癌患者中SPINK1过表达与不良预后具有显著的相关性(P=0.025),且与EGFR具有共同过表达的特征(P=0.003)。本研究中的体外实验证实SPINK1可促进前列腺癌细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),从而增强前列腺癌细胞的侵袭转移能力。进一步的研究证实SPINK1主要通过EGFR/MEK/ERK通路发挥促进EMT的作用,CTGF可能为该通路下游的关键作用分子。实验结果为SPINK1在中国前列腺癌中作为诊断指标及治疗靶点提供了更深入的实验及理论依据。第一部分SPINK1在前列腺癌组织中的表达、临床病理学特征及与预后的关系目的：1.研究中国前列腺癌组织中SPINK1过表达的频度及其与患者不良预后的相关性。2.探究在中国前列腺癌组织中SPINK1过表达与其他分子指标的相关性。结果：1.中国前列腺癌中SPINK1过表达的发生频率为7.6%,与患者不良预后相关。2. SPINK1过表达与TMPRSS2-ERG基因融合存在排他性。3. EGFR过表达的发生率在SPINK1阳性的前列腺癌病例中比在SPINK1阴性的前列腺癌病例中高。4. SPINK1阳性病例中E-Cadherin表达相对较低,vimentin表达相对较高。结论：在中国前列腺癌病例中SPINK1过表达的发生频率为7.6%,与西方国家接近。与关于SPINK1在西方国家的相关报道一致,SPINK1过表达与TMPRSS2-ERG基因融合呈现排他性存在,SPINK过表达与不良预后具有显著相关性。另外,我们首次证实在前列腺癌组织中SPINK1与EGFR存在共过表达的趋势。SPINK1阳性病例中E-Cadherin表达相对较低,vimentin表达相对较高,暗示SPINK1可能与前列腺癌细胞发生上皮间质转化过程有关。第二部分SPINK1促进前列腺癌细胞上皮间质转化目的：1.明确SPINK1是否可诱导前列腺癌细胞由上皮细胞表型向间质细胞表型转变。2.探究SPINK1是否可引起前列腺癌细胞上皮指标及间质指标蛋白表达量的改变。3.验证SPINK1对前列腺癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果：1. rSPINK1持续刺激6天后,RWPE、LnCap及VCap细胞中均含有一定比例的细胞变为长梭形,细胞失去极性,细胞分布较松散。2.western blot及免疫荧光技术均证明rSPINK1可引起RWPE细胞中E-Cadherin表达量增多、vimentin表达量减少,而转染SPINK1SiRNA则可引起22RV1细胞中E-Cadherin表达量上调、vimentin表达量下调。3.细胞划痕实验及Transwell实验证实rSPINK1可促进RWPE细胞迁移侵袭能力增强,SPINK1SiRNA可抑制22RV1细胞侵袭转移。结论：我们首次证实SPINK1在体外可促进前列腺癌细胞发生EMT。第三部分SPINK1促进上皮间质转化的机制研究目的：1.明确SPINK1是否通过EGFR通路促进EMT及具体通过哪条下游通路促进EMT。2.明确SPINK1通过EGFR通路调控的促进EMT的下游关键作用分子。结果：1. rSPINKl作用于RWPE细胞,可使其p-EGFR、p-STAT3、p-Akt、p-ERK水平升高。转染SPINK1SiRNA的22RV1细胞,相对于其对照组,EGFR、STAT3、 Akt、ERK磷酸化水平均显著降低。2.AG1478和U0126可几乎完全阻断rSPINKl对EMT分子指标的调节作用。而LY294002和AG490只可较低程度地抑制rSPINKl对EMT分子指标的调节作用。3.细胞划痕实验结果示AG1478、U0126、LY294002、AG490均可完全阻断rSPINK对细胞迁移能力的提高作用。侵袭实验结果示只有AG1478、U0126可阻断rSPINK对细胞侵袭的促进作用。4. rSPINK1处理RWPE细胞,SPINK1SiRNA转染22RV1细胞,snail slug、twist、 β-catenin、zeb1的mRNA表达量及核内蛋白表达量均无明显变化。5. rSPINKl处理RWPE细胞,CTGF表达量升高；SPINK1SiRNA转染22RV1细胞,CTGF表达量下降。6. CTGF SiRNA转染RWPE细胞可部分逆转rSPINKl促进EMT的作用。7.AG1478和U0126可阻断rSPINKl对CTGF的上调作用,而LY294002和AG490无此作用。结论：1.SPINK1主要通过EGFR/MEK/ERK通路发挥促进EMT的作用。2.CTGF可能为SPINK1/EGFR/MEK/ERK促进EMT的下游关键作用分子。